PCR - 和光純薬工業

PCR 酵素 選択フローチャート
TA クローニング可能
1 kb 以下が特に高収量
毎日使うから
低コストで！
THUNDER
Gene
TA クローニングする
なら高収量に着目
1 kb 以上ならこちら
コロニー PCR には
プレミックスタイプ
高速反応
複数のバンドが出て困ったら
1 kb 以下が特に高収量
遺 伝 子 探 索 や マ ル チ プ レ ッ ク ス PCR に は
Hot-Start 機能をもつ高特異性の酵素をチョ
イス
1 kb 以上ならこちら
修飾塩基の導入を検討するなら
1 kb 以下が特に高収量
微生物由来配列を増幅・微量コピーからの増
幅には宿主菌 DNA の混入が最小限の高精製
度品を
Hot-Start PCR 可能・高特異
平滑クローニング可能
Gene
NT
Gene RED PCR Mix
THUNDER
Gold
Hot-Start Gene
Hot-Start Gene
NT
Methyl
Gene
FP
THUNDER
Gold LD
Pho
発現させたい遺伝子を増幅するなら正確性を
重視
Hot-Start PCR 可能・GC リッチ領域の増幅
GC リッチ領域の増幅・TA クローニング
鋳型 DNA の精製ができない・
PCR 阻害物質を含む
Hot-Start PCR 可能
TOPOTAQ HiFi
TOPOTAQ
Ampdirect Plus
60
02_2013_P060.indd 60
13.2.12 1:43:12 PM
PCR
ＰＣＲ
02
■ スタンダード
THUNDER
PCR 用酵素
DNA Polymerase
62
Gene RED PCR Mix
62
Gene
63
NT
Gene
63
Gene
FP
■ Hot-Start
63
PCR 用酵素
THUNDER
Gold DNA Polymerase
64
THUNDER
Gold DNA Polymerase LD
64
Hot-Start Gene
NT
65
Hot-Start Gene
65
HGS Diamond
65
■ 高正確性酵素
Pho DNA Polymerase
66
TOPOTAQ DNA polymerase
67
■ PCR
装置
Thermal cycler Wako
68
Ampdirect
69
Plus
Lyppo
70
PCR Marker Maker
70
Primers
71
NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE
1.
Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,789,224, 5,618,711, 6,127,155 and claims
outside the US corresponding to expired US Patent No. 5,079,352. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing
patent claims for using only this amount of product for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim, no right to perform any patented method,
and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is
conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further
information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.
2.
Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 6,127,155, 5,677,152 (claims 1 to 23 only), 5,773,258
(claims 1 and 6 only), and claims outside the US corresponding to expired US Patent No. 5,079,352. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity
from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim and no right
to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed
expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information
on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.
マークのついているものは、
（株）
ニッポンジーン関連製品です。
それ以外は和光純薬工業（株）の製品あるいは取り扱い製品です。
61
02_2013_P061-071.indd 61
13.2.12 1:43:31 PM
PCR
THUNDER
本品は、
す。通常タイプの
きます。
F
ＰＣＲ
02
DNA Polymerase
由来の組換え体 DNA ポリメラーゼで
DNA ポリメラーゼとして様々な用途に使用で
312-07053
316-07051
50 units
250 units
5,600
22,500
250 units
22,500
（Mg2+ free buffer）
313-07061
特 長
1. 高い特異性。
2. PCR 産物は TA クローニングに使用可能。
構 成 1. THUNDER
DNA Polymerase
2. dNTP Mixture（2.0 mmol/ each）
3. 10×PCR Buffer（15 mmol/ Mg2＋）
（312-07053）
50 units
0.2 m ×1本
（316-07051）
250 units
1.0 m ×1本
（313-07061）
250 units
1.0 m ×1本
0.2 m ×1本
1.0 m ×1本
̶
4. 10×PCR BufferⅡ（Mg2＋free）
̶
̶
1.0 m ×1本
5. 25 mmol/ MgCl2
̶
̶
0.8 m ×1本
活 性 5 units/μ
単位の定義 1 unit は、activated calf thymus DNA をプライマー / 鋳型として、74℃、30 分間で 10 nmol のデオキシ
ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
形 状 20 mmol/ Tris-HCl（pH 8.0）, 100 mmol/ KCl, 1 mmol/ DTT, 0.5%（v/v）NP-40, 0.1 mmol/ EDTA,
50%（v/v）Glycerol, 0.5%（v/v）Tween 20
※添付バッファー組成
・10 × PCR Buffer：100 mmol/ Tris-HCl（pH 8.3）, 500 mmol/ KCl, 15 mmol/ MgCl2
・10 × PCR Buffer Ⅱ：100 mmol/ Tris-HCl（pH 8.3）, 500 mmol/ KCl
純 度 本酵素 10 units と 1μg のλ DNA/
d Ⅲを、74℃で 1 時間反応させても、アガロースゲル電気泳動パター
ンに変化は認められない。
本品のライセンス情報は p.61〔1〕をご参照下さい。
Gene RED PCR Mix
Gene RED PCR Mix は、
2 ×プレミックスタイプの PCR 用試薬です。
本品には PCR に必要な
DNA polymerase、dNTPs、MgCl2 など
を含むため、鋳型 DNA とプライマーを加えるだけで PCR ができま
す。また、本品にはあらかじめ比重と色素が含まれているため、PCR
後の反応液はそのまま電気泳動ゲルにアプライすることができます。
本品は、高速 PCR にも対応できるようバッファー組成を最適化し
ています。比較的 GC リッチな配列や長鎖（10 kbp）も増幅すること
ができ、得られた PCR 産物は TA クローニングに使用可能と、幅広
い実験に対応しています。
F
労57-2
318-07474
48 回分
314-07471
96 回分
5,600
8,600
310-07473
96 回分× 10
67,000
特 長
1. 簡単操作の 2 ×プレミックスタイプ。
2. PCR 後の反応液を直接アガロースゲル電
気泳動にアプライ可能。
3. 高速反応が可能。
構 成
（48 回分）
（96 回分）
1. Gene RED PCR Mix（2 ×）
1.2 m × 1 本
1.2 m × 2 本
使 用 法 反応液が 50 の場合、
25 の Gene RED PCR Mix
（2 ×）
に鋳型 DNA とプライマーを添加して使用します。
備 考 本品に添加されている色素（赤色）は、PCR を阻害せず、3% Agarose 21 で電気泳動した場合は 160 bp 付近、
1% Agarose S で電気泳動した場合は 1.5 kbp 付近に確認できます。
本品のライセンス情報は p.61〔1〕をご参照下さい。
関連製品
312-07651 2 × M13 Primer Mix（1.2 m × 2 本） ………………………………………………………
マニュアルは
p.443参照
96 回用
8,000
本品は、Gene RED PCR Mixと組み合わせて使用することで、迅速かつ簡単にM13プライマーを使用するコロ
ニー PCRを行うことができます。
62
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 62
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:31 PM
PCR
Gene
F
dNTP
Mix.
Gene
NT は、
YT1 の DNA ポリメラーゼ
遺伝子をクローニングし、大腸菌にて発現させ、分離精製した耐熱性
DNA ポリメラーゼです。天然型
DNA ポリメラーゼと同じ機能
を有しており、通常の PCR に使用できます。また、ターミナルトラ
ンスフェラーゼ活性を有しており、得られた PCR 産物は TA クロー
ニングに使用することができます。
312-03234
50 units 5,600
318-03231
250 units 22,500
314-03233
250 units × 4
79,000
構 成
（312-03234）
1. Gene
NT
50 units
2. dNTP Mixture（2.5 mmol/ each）
160 μ ×１本
3. 10 × Gene
Universal Buffer（15 mmol/ Mg2＋） 1 m ×１本
ＰＣＲ
10×
Buffer
NT
02
（318-03231）
250 units
800 μ ×１本
1 m ×１本
M.W.
94 kDa
活 性 5 units/μ
形 状 20 mmol/ Tris-HCl（pH 8.0），100 mmol/ KCl, 0.1 mmol/ EDTA, 0.5％ Tween 20, 0.5% Triton X-100, 1 mmol/ DTT, 50％ Glycerol
単位の定義、純度は Gene
参照
本品のライセンス情報は、p.61〔1〕をご参照下さい。
Gene
F
10×
Buffer
dNTP
Mix.
Gene
（ジーンタック）は、
YT1のDNAポリ
312-02874
50 units 5,600
メラーゼ遺伝子をクローニングし、改変したものを大腸菌にて発現さ
318-02871
250 units 22,500
せ、分離精製した耐熱性DNAポリメラーゼで、PCR法に適していま
314-02873
250 units × 4
79,000
す。また、ターミナルトランスフェラーゼ活性を有しており、得られた
PCR 産物はTA クローニングに使用することができます。
DNA ポリメラーゼの N 末端を一部欠失させてあるため、5´→ 3´エキソヌクレアーゼ活性を有していません。また、
特に 1 kbp 以下の DNA 断片の増幅効率が高くなります。
構 成
（312-02874）
（318-02871）
1. Gene
50 units
250 units
2. dNTP Mixture（2.5 mmol/ each）
160 μ ×１本
800 μ ×１本
3. 10×Gene
Universal Buffer（15 mmol/ Mg2＋） 1 m ×１本
1 m ×１本
M.W.
68 kDa
活 性 5 units/μ
単位の定義 1 unit は、activated calf thymus DNA をプライマー / 鋳型として 74℃、30 分間に 10 nmol のデオキシヌ
クレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
形 状 20 mmol/ Tris-HCl（pH 8.0），100 mmol/ KCl, 0.1 mmol/ EDTA, 0.5％ Tween 20, 1 mmol/ DTT, 50％ Glycerol
純 度 本酵素 10 units と１ g のλ/
d Ⅲ digest とを 74℃、１時間反応させてもアガロースゲル電気泳動のパ
ターンに変化は認められない。
※10×Gene
Universal Buffer（Mg2＋ free）および 100 mmol/ MgCl2 もご用意しておりますので、ご希望の方は和
光純薬工業株式会社の代理店または和光純薬工業株式会社までご連絡下さい。
本品のライセンス情報は、p.61〔1〕をご参照下さい。
Gene
F
10×
Buffer
dNTP
Mix.
FP
Gene
FP は、独自の技法によって Gene
をより高純度に
311-04164
50 units 5,600
精製したもので、宿主菌由来のゲノム DNA のコンタミを極力抑えた
317-04161
250 units 26,500
DNA ポリメラーゼです。
313-04163
250 units × 4
93,000
本品は Gene
と同様の機能を有しており、１ kbp 以下の DNA
フラグメントの増幅効率が高く、また 5´→ 3´エキソヌクレアーゼ活
性を有していないという特長を持っています。また、ターミナルトランスフェラーゼ活性を有しており、得られた PCR
産物は TA クローニングに使用することができます。
構 成
（311-04164）
1. Gene
FP
50 units
2. dNTP Mixture（2.5 mmol/ each）
160 μ ×１本
3. 10 × Gene
Universal Buffer（15 mmol/ Mg2＋） 1 m ×１本
M.W.
68 kDa
活 性 5 units/μ
単位の定義、形状、純度は Gene
参照
本品のライセンス情報は、p.61〔1〕をご参照下さい。
63
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 63
（317-04161）
250 units
800 μ ×１本
1 m ×１本
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:32 PM
PCR
THUNDER
Gold DNA Polymerase
ＰＣＲ
THUNDER
DNA Polymerase の活性領域を化学修飾すること
で酵素活性をコントロールしており、PCR サイクルに入る前に 95℃、
5 ∼ 10 分間の熱処理によって酵素の活性化処理を行います。ホット
スタートとタイムリリースによって目的としたターゲットの増幅のみ
に酵素を集中させ、特異的で高品質な PCR 産物が得られます。
F
02
316-07073
310-07071
50 units
250 units
6,300
25,000
250 units
25,000
（Mg2+ free buffer）
317-07081
特 長
1. Hot-start 機能を持つ。
2. 高い特異性。
3. PCR 産物は TA クローニングに使用可能。
構 成 1. THUNDER
Gold DNA Polymerase
2. dNTP Mixture（2.0 mmol/ each）
3. 10×PCR Gold Buffer（15 mmol/ Mg2＋）
（316-07073）
50 units
0.2 m ×1本
（310-07071）
250 units
1.0 m ×1本
（317-07081）
250 units
1.0 m ×1本
0.2 m ×1本
1.0 m ×1本
̶
4. 10×PCR BufferⅡ（Mg2＋ free）
̶
̶
1.0 m ×1本
5. 25 mmol/ MgCl2
̶
̶
0.8 m ×1本
活 性 5 units/μ
形 状 20 mmol/ Tris-HCl（pH 9.0）, 100 mmol/ KCl, 1 mmol/ DTT, 0.1 mmol/ EDTA, 50%（v/v）Glycerol,
0.5%（v/v）Tween 20
単位の定義、純度は THUNDER
DNA Polymerase 参照
※添付バッファー組成
・10 × PCR Gold Buffer： 150 mmol/ Tris-HCl（pH 8.0）, 500 mmol/ KCl, 15 mmol/ MgCl2
・10 × PCR Buffer Ⅱ：100 mmol/ Tris-HCl（pH 8.3）, 500 mmol/ KCl
本品のライセンス情報は p.61〔2〕をご参照下さい。
THUNDER
Gold DNA Polymerase LD
THUNDER
Gold DNA Polymerase の精製度を更に高め、ホ
スト由来のバクテリア DNA のコンタミを少なくしたもので、ウイル
スやバクテリアの研究での使用に最適です。ホットスタート機能で、
特異性の高い PCR が可能です。
F
310-07093
314-07091
50 units
250 units
7,100
31,500
250 units
31,500
（Mg2+ free buffer）
317-07101
特 長
1.
2.
3.
4.
Hot-start 機能を持つ。
高い特異性。
PCR 産物は TA クローニングに使用可能。
宿主菌由来 DNA の混入を極力少なくした
高い精製度。
構 成 （310-07093） （314-07091） （317-07101）
1. THUNDER
Gold DNA Polymerase LD
50 units
250 units
250 units
2. dNTP Mixture（2.0 mmol/ each）
0.2 m ×1本
1.0 m ×1本
1.0 m ×1本
3. 10×PCR Gold Buffer（15 mmol/ Mg2＋）
0.2 m ×1本
1.0 m ×1本
̶
4. 10×PCR BufferⅡ（Mg2＋ free）
̶
̶
1.0 m ×1本
5. 25 mmol/ MgCl2
̶
̶
0.8 m ×1本
活 性 5 units/μ
形 状 20 mmol/ Tris-HCl（pH 9.0）, 100 mmol/ KCl, 1 mmol/ DTT, 0.1 mmol/ EDTA, 50%（v/v）Glycerol,
0.5%（v/v）Tween 20
単位の定義、純度は THUNDER
DNA Polymerase 参照
本品のライセンス情報は p.61〔2〕をご参照下さい。
64
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 64
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:32 PM
PCR
Hot-Start Gene
F
dNTP
Mix.
本品は、ホットスタート PCR 用の耐熱性 DNA ポリメラーゼです。
PCR サイクルに入る前に 95℃、5 分間の熱処理によって酵素の活性
化処理を行います。
本品は、天然型
DNA ポリメラーゼと同じ機能を有している
「Gene
NT」に化学的な修飾を施しています。5’→ 3’エキソヌク
レアーゼ活性を有しますが、3’→ 5’エキソヌクレアーゼ活性を有し
ていません。また、ターミナルトランスフェラーゼ活性を有しており、
得られた PCR 産物は TA クローニングに使用することができます。
構 成
1. Hot-Start Gene
NT
2. dNTP Mixture (2.5 mmol/ each)
3. 10 × HS Gene
NT Buffer
活 性 2.5 units/
M.W.、単位の定義、形状、純度は Gene
NT 参照
本品のライセンス情報は p.61〔2〕をご参照下さい。
（315-07521）
50 units
160
×1本
1 m ×1本
315-07521
50 units 6,600
311-07523
250 units 26,500
319-07524
250 units × 4
93,000
ＰＣＲ
10×
Buffer
NT
02
特 長
1. 高い特異性。
2. Hot-Start 機能を持つ。
3. PCR 産物は TA クローニングに使用可能。
（311-07523）
250 units
0.8 m × 1 本
1 m ×1本
Hot-Start Gene
F
10×
Buffer
10×B
Buffer
dNTP
Mix.
本品は、ホットスタート PCR 用の耐熱性 DNA ポリメラーゼです。
PCR サイクルに入る前に 95℃、5 分間の熱処理によって酵素の活性
化処理を行います。本品は、宿主菌由来の DNA のコンタミを極力抑
えた改変型 Taq DNA ポリメラーゼである「Gene Taq FP」に化学
的な修飾を施しています。得られた PCR 産物は TA クローニングに
使用することができます。
また本品には、従来からある 10 × Gene Taq Universal Buffer と、
10 × Brilliant Buffer の 2 種類の反応バッファーを添付しています。
10 × Brilliant Buffer は PCR の特異性を上げる効果を持ち合わせて
おり、短鎖 DNA の増幅の場合にのみ使用できます。
構 成
2. dNTP Mixture (2.5 mmol/ each)
3. 10 × Gene Taq Universal Buffer (15 mmol/ Mg2+)
4. 10 × Brilliant Buffer (20 mmol/ Mg2+)
活 性 2.5 units/μ
M.W.、単位の定義、形状、純度は Gene
参照
本品のライセンス情報は p.61〔2〕をご参照下さい。
10×
Buffer
MgCl2
Sol.
6,600
250 units 26,500
315-07043
250 units × 4
93,000
特 長
1. 高い特異性と高い DNA 収量。
2. Hot-Start 機能を持ち、室温での反応液調
製が可能。
3. マルチプレックス PCR に最適。
（319-07041）
50 units
250 units
160μ × 1 本
1 m × 1 本
0.2 m × 1 本
800μ × 1 本
1 m × 1 本
1 m × 1 本
®
製造元 EUROGENTEC Bel S.A.
輸入元 株式会社ニッポンジーン
F
50 units 319-07041
（313-07044）
1. Hot-Start Gene Taq
HGS Diamond
313-07044
318-81251
本品は、ホットスタート PCR 用の耐熱性 DNA ポリメラーゼです。
PCR サイクルに入る前に 95℃、10 分間の熱処理によって酵素の活性
化処理を行います。本品は、ホスト由来のバクテリア DNA の混入を
極力少なくしたものです。そのため、バクテリアの研究や qPCR の
使用にとても適しています。
1,000 units
90,000
特 長
1. 高い特異性と高い DNA 収量。
2. Hot-Start 機能を持つ。
3. 宿主菌由来 DNA の混入を極力少なくした
高い精製度。
®
1. HGS Diamond
1,000 units (200 ) × 1 本
2. 10 × Reaction buffer
6 m ×1本
組成：150 mmol/ Tris-HCl, 500 mmol/ KCl, stabilizer
3. 25 mmol/ MgCl2 solution
6 m ×1本
活 性 ＞ 5 units/
形 状 20 mmol/ Tris-HCl, 1 mmol/ DTT, 0.1 mmol/ EDTA, 0.1 mol/ KCl, 0.5%（v/v）NP-40,
0.5%（v/v）Tween 20, 50%（v/v）Glycerol, stabilizer
構 成
65
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 65
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:32 PM
PCR
Pho DNA Polymerase
ＰＣＲ
本品は、超好熱菌
OT3 由来の耐熱性 DNA
Polymerase です。
5’→ 3’exonuclease 活性は有していません。
3’→ 5’exonuclease 活性（校正活性）を有しているため、得られる
PCR 産物は平滑末端です。必要に応じてリン酸化した後に、平滑末
端のベクターにライゲーションできます。また、変異の頻度は Pol Ⅰ
型よりも 10 倍程度低く、合成の忠実度が高いため正確な増幅が必要
とされる PCR に適しています。
F
02
310-07113
50 units
6,900
314-07111
250 units
27,500
特 長
1. 3’→ 5’exonuclease 活性
（校正活性）を持
ち、PCR 産物は平滑末端。
2. 合成の忠実度が高く、正確性の高い PCR
が可能。
3. 長鎖 DNA や GC 含量の高い DNA を増幅
可能。
4. PCR の阻害物質である SDS の影響を受け
にくい。
5. PCR 変性温度 92℃∼ 98℃で酵素失活は認
められない。
単位の定義 1 unit は、activated calf thymus DNA をプライマー /
鋳型として、74℃、30 分間に 10 nmol のデオキシヌク
レオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
純 度 本酵素 10 units と 1 g の pBR322 DNA とを 74℃、1
時間反応させてもアガロースゲル電気泳動パターンに変
化は認められない。
構 成
（310-07113）
1. Pho DNA Polymerase
50 units
2. dNTP Mixture（2.5 mmol/ each）
160 μ ×２本
3. 10 × Pho Reaction Buffer（10 mmol/ Mg2＋） 1 m × 1 本
（314-07111）
250 units
800 μ × 2 本
1 m × 1 本
活 性 2.5 units/
形 状 50 mmol/ Tris-HCl（pH 8.0）, 100 mmol/ NaCl, 1 mmol/ DTT, 0.1 mmol/ EDTA, 50%（v/v）Glycerol,
0.1% Triton X-100
使 用 例 ①λ DNA を鋳型にした増幅（200 bp ∼ 20 kbp）
M1 1
2
3
4
5
6
7
8
9 M2
M 1： Gene Ladder Wide 1（0.1 - 20 kbp）
M 2： OneSTEP Marker 1（λ /
d Ⅲ digest）
Lane 1： 200 bp
Lane 2： 500 bp
Lane 3：
1 kbp
Lane 4：
3 kbp
Lane 5：
5 kbp
Lane 6：
8 kbp
Lane 7： 10 kbp
Lane 8： 15 kbp
Lane 9： 20 kbp
0.8% Agarose S
② GC-rich な領域の増幅
HeLa 細胞のゲノム DNA を鋳型とし ApoE 遺伝子の 577 bp（GC 含量 72%）の領域を増幅した。増幅の際
に Betaine（終濃度 0.5 M, 1 M, 1.5 M, 2 M）、DMSO（終濃度 2.5%, 5%, 10%）、Formamide（終濃度 2.5%,
5%, 10%）をそれぞれ反応液に添加した。
本試験では、終濃度 5.0％の Formamide を添加した系で目的サイズの DNA 断片を特異的に増幅することが
できた。（Lane 9 ○印）
Betaine
M
C
1
2
3
DMSO
4
5
6
Formamide
7
8
9
10
M：Gene Ladder 100
C：添加剤なし
Lane 1：0.5M Betaine 添加
Lane 2：1.0M Betaine 添加
Lane 3：1.5M Betaine 添加
Lane 4：2.0M Betaine 添加
Lane 5：2.5% DMSO 添加
Lane 6：5.0% DMSO 添加
Lane 7：10.0% DMSO 添加
Lane 8：2.5% Formamide 添加
Lane 9：5.0% Formamide 添加
Lane 10：10.0% Formamide 添加
2% Agarose S
備 考 本品は、独立行政法人産業技術総合研究所の研究成果
（松井郁夫ら、特許第 3015878 号）が活用されており
ます。
66
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 66
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:33 PM
PCR
TOPOTAQ DNA polymerase
2×
Buffer
TOPOTAQ シリーズは、
DNA ポリメラーゼ由来の触媒ドメ
インとメタン細菌である
由来の非特異的な
DNA 結合ドメインを融合した新規の耐熱性 DNA ポリメラーゼです。
これらの性質により、これまでの酵素では困難であった、GC リッチ
領域の増幅が酵素のみで可能です。TOPOTAQ HiFi は酵素のみで
DNA ポリメラーゼに比べ、読み取りの正確性が約 10 倍で GC リッ
チ領域増幅の高い特性を有します。
TOPOTAQ DNA Polymerase
574-98041
100
TOPOTAQ HiFi DNA Polymerase
587-81501
100
FID（T016）
units 33,200
FID（H016）
units 41,500
FID（H056）
500 units 163,300
583-81503
ＰＣＲ
Ref
02
特 長
1. 高い耐熱性を有する（熱変性 100℃以上）。
2. GC リッチ領域の増幅が可能。
3. 高 い 塩 濃 度、DNA イ ン タ ー カ レ ー タ ー、
有機溶媒、血液、尿素などの存在下でも増
幅可能。
内 容
34
×1本
3 units/
TOPOTAQ HiFi
100 units
500 units
34
×1本
170
×1本
3 units/
3 units/
1 m ×1本
1 m ×1本
TOPOTAQ
各 DNA polymerase
活 性＊
2 × TOPOTAQ Amplification
Buffer（6 mmol/ MgCl2 含む）
1 × TOPOTAQ Dilution Buffer
1 × TOPOTAQ HiFi Dilution Buffer
100
×1本
−
100
5 m ×1本
−
×1本
510
−
×1本
＊：予告なく活性が変更になる場合がございますのでご了承下さい。
使用上の注意 TOPOTAQ、TOPOTAQ HiFi は、凍結不可です。
単位の定義
備 考
1 unit は、鋳型と 1μmol/ fluorescein 標識プライマー / 複合体を用いたプライマー伸長法において、
70℃、30 分での反応で 10 nmol のデオキシリボヌクレオチドを酸不溶性画分に取り込む酵素活性とする。
TOPOTAQ HiFi DNA Polymerase について、
AV19 由来のクローン化された GC リッ
チ領域 4.1 kb を用いて、ダイレクトシークエンスを行った。この結果、エラー率が AmpliTaq +
DNA
Polymerase より 25.1％低いことを確認している。
特長の比較
特 長
変性温度
3'- 5' exonuclease 活性
5'- 3' exonuclease 活性
応用例
TOPOTAQ
TOPOTAQ HiFi
GC リッチ領域12 kb まで増幅できる。 TOPOTAQ に、3'-5' exonuclease 活性
Hot-start 機能を持つ。
を持たせた酵素。
PCR 産物は TA クローニングに使用可能。Hot-start 機能を持つ。
94 ∼ 98℃
94 ∼ 98℃
−
＋
−
−
GC 含量に関係なく、すべての DNA 配 高い Fidelity を要求する GC リッチ領
列に対応
域の増幅
URL http://www.fidelitysystems.com/ よりプロトコールをご覧になれます。
文 献
1）Pavlov, A. R., Belova, G, I., Kozyavkin, S. A. and Slesarev, A. I. :
, 99, 13510（2002）
67
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 67
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:33 PM
PCR
Thermal cycler Wako プログラマブル温度コントロールシステム
ＰＣＲ
プログラマブルな加熱冷却装置です。
サーマルサイクラー Wako WK-0232
02
294-34271
1台
300,000
サーマルサイクラー Wako WK-0518
291-34281
1台
300,000
特 長
1. 少量サンプルに最適な固定ブロックタイプ
（0.2 m と 0.5 m の２タイプ）。
2. 5.5 インチのワイドな液晶画面により、優
れた操作性。
3. 最大 75 プログラムを保存可能。
4. LongPCR に適したエクステンション機能、
タッチダウン PCR に適したタッチダウン
機能を装備。
装置仕様
品 名
サーマルサイクラー Wako WK-0232
サーマルサイクラー Wako WK-0518
サンプル数
0.2 m × 32 本（８×４）
0.5 m × 18 本（６×３）
温度制御方法
マイクロプロセッサによる PID 制御
加温・冷却方式
ペルチェ素子
温度上昇スピード（55℃→ 95℃範囲時）
1℃／ sec. 以上（室温 25℃）
温度下降スピード（95℃→ 55℃範囲時）
1℃／ sec. 以上（室温 25℃）
温度制御範囲
3.0 ∼ 99.9℃（室温 25℃）
設定温度に対して± 0.3℃（30 ∼ 95℃）、
温度変動幅
同一ウェル内の平均温度に対して± 0.1℃（30 ∼ 95℃）
プログラムファイル数
75 ファイル（15 ファイル×５ボックス）
ホール間± 0.5℃以内（30 ∼ 95℃）
表 示 部
5.5 インチ ワイド液晶画面
外形寸法
234W × 370D × 158H（mm）
電 源
AC 100 V 5 A 50/60 Hz
質 量
5.5 kg
68
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 68
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:33 PM
PCR
Ampdirect® Plus DNA 精製不要でサンプルからダイレクトに PCR 可能な試薬
Ampdirect® Plus は、サンプル中に含まれる PCR 阻害物質の影
響を抑制する働きをもつ PCR 用バッファーです。本品の使用によ
り、血液や動植物組織、SDS などを含む各種サンプルから DNA を
精製することなく PCR を行うことが可能です。 推奨酵素である
BIOTAQTM HS DNA Polymerase と 組 み 合 わ せ る こ と で 最 高 の パ
Ampdirect Plus® 酸素セット 島津（241-08890-92）
602-21421
500 回分 35,000
Ampdirect Plus®
島津（241-08890-98）
605-21411
500 回分 25,000
フォーマンスを発揮します。
特 長
構 成
Ampdirect® Plus 酵素セット
1. Ampdirect® Plus（MgCl2, dNTP 含む）
2. BIOTAQTM HS DNA Polymerase
1 m ×5
250 units (5 units/ )
Ampdirect® Plus
1. Ampdirect® Plus（MgCl2, dNTP 含む）
1. DNA 精製不要で、簡便かつ迅速な PCR が
可能。
2. DNA 精製不要なため、微量サンプルから
の PCR に最適。
3. サンプル中の夾雑物による阻害を受けにく
いバッファー組成。
1 m ×5
ＰＣＲ
F
02
【使用例：マウステイル溶解液からの PCR】
各種 PCR 阻害物質の影響を抑える作用を持つ Ampdirect® Plus（Buffer）と BIOTAQ ™（推奨酵素）を使用してマウス
テイルからの PCR を行った。
反応液 (20 )
2× Ampdirect Plus 10
BIOTAQ™
0.5 U
primer-F
1 M
primer-R1
0.5 M
primer-R2
0.25 M
Distilled Water up to 20
溶解液 Final
Tris-HCl (pH8.0)
20 mM
EDTA
5 mM
NaCl
400 mM
SDS
0.3%
Proteinase K
200 g/m
⇒100 μ の溶解液にテイル 1 ∼ 5 mm
を添加。溶解反応は室温で 10 分間。
上溝を別チューブへ
テイル溶解＊ 1
95℃ , 5 分間＊ 2
PCR プログラム
95℃、10 min
94℃、30 sec
40 cycles 58℃、60 sec
72℃、90 sec
72℃、7 min
0.5 を反応液へ
( チューブ交換＊ 3)
反応液調製
PCR
( ボルテックス +55℃ , 60 分間 )
＊ 1 新鮮なマウステイルの場合、溶解液反応は室温 , 10 分間でも可能
上記以外の溶解液を使用の場合や長期保存されたテイルの場合 55℃ , 3 時間にて溶解の上、溶解液を精製水にて 10 倍希釈することを推奨。
＊ 2 ＊ 1 にて、マウステイルを 10 分間で溶解させた場合は「95℃、5 分間」の操作を行って下さい。
＊ 3 コンタミネーション防止のため。
wild type
mutant
マイクロチップ電気泳動装置 MultiNA
精製 DNA とマウステイル溶解液を同条件にて PCR を行った。
MultiNA による増幅産物分析結果（ゲルイメージ）
得られた PCR 産物をマイクロチップ電気泳動装置 MultiNA（島津
製作所）にて検出。
結果：精製 DNA と同等以上の感度で検出ができた。
69
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 69
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:34 PM
PCR
Lyppo PCR 用マウステイル溶解試薬
ＰＣＲ
本品は、株式会社遺伝子改変研究開発で開発された、マウステイル
からの PCR が簡便に行える PCR 用マウステイル溶解試薬です。マウ
ス遺伝子型の判定において、一般的には、酵素処理し、フェノール /
クロロホルム処理・エタノール沈殿後、PCR 反応を行うため、煩雑
な操作が多く、時間もかかります。本品では 1 ステップの操作であ
り、簡便・短時間に処理が完了します。また、マウステイルから一本
のチューブで PCR サンプルが得られるので、サンプルの間違いがあ
りません。
F
02
使 用 法
㈱遺伝子改変研究開発
300-95681
10 m
11,000
特 長
1. Lyppo 溶液に酵素を加え加温するだけなの
で、簡便。
2. フェノール抽出、エタノール沈澱、遠心等
の操作は不要。
3. 加温時間は 1 ∼ 16 時間、短時間で反応完了。
1. マウステイル約 3 ∼ 4 mm をマイクロチューブの底
に入れる。
2. Lyppo 液 100
に添付の酵素液 1
を混ぜ調製し、マイクロチューブに加える。
3. キャップをして 60℃で一晩（約 16 時間）保温。
4. 1 m の滅菌水を加え、よく撹拌する（ボルテックス）。
5. 上澄み 1
をテンプレート DNA として PCR 反応する（PCR 反応全量 15 ）。
6. 反応物の全量を 1 ∼ 1.5％アガロースゲルで電気泳動する。
使 用 例
60℃で処理時間
PCRに用いた上澄みの量
0′ 10′ 30′ 1 H 2 H 16 H
M
0.1
M：100 bp Marker DNA
60℃で 2 時間処理や上澄み量 0.5
0.5
1
2
マウステイルからの遺伝子型決定例
3
M
＋/− ＋/− −/− ＋/− ＋/＋ −/− ＋/− ＋/− ＋/＋ ＋/−
でも、問題なく PCR 反応は完了した。
PCR Marker Maker
F
Gene
は
p.63参照
PCR Marker Maker は PCR により DNA サイズマーカーを作製す
るための試薬です。
本品は鋳型 DNA、プライマー、反応バッファーの混合液で、
DNA ポリメラーゼ“Gene
”を加えるだけですぐに PCR を行う
ことができます。また、PCR を行う際のポジティブコントロールと
しても使用できます。さらに、プライマーを選択することにより、希
望のサイズマーカーを得ることができます。
PCR Marker
317-03061
PCR Marker
311-03081
PCR Marker
318-03111
PCR Marker
312-03131
構 成
特 長
反応 Mixture 50 μ × 10 本
本品により得られる DNA 断片の長さ
100L
100H
200U
200E
…… 101
…… 601
…… 101
…… 200
bp
bp
bp
bp
200
702
299
398
bp
bp
bp
bp
299
800
502
601
bp
bp
bp
bp
398
906
702
805
bp
502 bp
bp 1,005 bp
bp
906 bp
bp 1,005 bp
使 用 法 DNA サイズマーカーの作製方法
反応 Mixture ＊ 1 50 μ
← Gene
0.5 μ ← 必要であればミネラルオイルを重層
PCR ＊ 2
94℃ 30 秒間
55℃ 30 秒間 25 サイクル＊ 3
72℃ 60 秒間
電気泳動
＊ 1 本品と異なる PCR 用チューブを使用する際には使用する
チューブに移しかえて下さい。
本品のチューブを使用する際にはラベルをはがして下さい。
＊ 2 得られた PCR 産物は 4℃で約 1 か月程度保存可能です。
＊ 3 この PCR の反応系は Gene
に適したものです。異な
る反応系で使用する場合、できるだけこの反応系に近い条
件にして下さい。
Maker 100L
10 回用
15,000
10 回用
15,000
10 回用
15,000
10 回用
15,000
Maker 100H
Maker 200U
Maker 200E
1. 鋳型 DNA 、プライマー、反応バッファー
が既に混合されており、Gene
を加え
るだけで PCR を行うことができるので、
操作が簡便。
2. PCR により増幅された DNA がサイズマー
カーとして使用可能。
3. プ ラ イ マ ー（100L、100H、200U、200E）
を選択することにより、100 ∼ 500 bp ま
たは 600 ∼ 1,000 bp の範囲での約 100 bp
DNA ラダー、あるいは 100 ∼ 1,000 bp の
範囲での約 200 bp DNA ラダーの内から、
希望のサイズマーカーを得ることが可能。
4. PCR を行う際のポジティブコントロール
として使用可能。
5. １回の PCR で約 10 μg の産物を取得可能。
70
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 70
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:34 PM
PCR
Primers
遺伝子はヒトのガン抑制遺伝子で、多くのガン細胞で変異が確
認されています。
遺伝子の変異の検出方法として、
遺伝子の
エキソンを PCR 法で増幅し、シークエンシングや SSCP 解析が行わ
れています。
本品は、
遺伝子の各エキソンを含む領域を増幅するようにデザ
インした forward および reverse のプライマーのセットです。
PCR による増幅部位とそのサイズは下図の通りです。
Primer Exon 2, 3
312-03491
Primer Exon 4
315-03501
） 100
×1本
2. reverse（20 pmol/
） 100
×1本
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
100 回分
23,000
02
Primer Exon 5
312-03511
Primer Exon 6
319-03521
構 成 1. forward（20 pmol/
100 回分
ＰＣＲ
F
Primer Exon 7
316-03531
Primer Exon 8, 9
ヒト
遺伝子の概要と増幅される DNA 断片のサイズ
は、増幅部位を示す。矢印は、プライマーを表す。
1）
2）プライマーは各エキソン近傍のイントロン内に設定されている
が、Exon 6 の forward のプライマーは Exon 5 内に、Exon11 の
reverse のプライマーは Exon11 内に設定されている。
使 用 例 本品を用いた
313-03541
Primer Exon 10
310-03551
Primer Exon 11
317-03561
遺伝子の各エキソンの増幅
Lane 1：Exon 2, 3
Lane 2：Exon 4
Lane 3：Exon 5
Lane 4：Exon 6
Lane 5：Exon 7
Lane 6：Exon 8, 9
Lane 7：Exon 10
Lane 8：Exon 11
M：Marker 5（φX174/
3％ Agarose 21
ISOHAIRは
p.22参照
cⅡ digest）
＊ ISOHAIR（毛髪および爪からの DNA 抽出キット：Code No.319-03401）を用いて、毛髪（毛根部 1 cm）より抽出したゲノム DNA を鋳型として用いた。
71
http://www.wako-chem.co.jp
02_2013_P061-071.indd 71
http://www.nippongene.com
13.2.12 1:43:34 PM