Comments
Description
Transcript
平成 20 年度 新潟生化学懇話会 抄録集
ᖲᠺ 20 ᖳᗐࠈ᩺₪⏍Ꮥ᠋リఌࠈᢊ㘋㞗 ᖲᠺ 20 ᖳ 6 ᭮ 21 㸝ᅰ㸞13:00̿ ᩺₪ኬᏕ᪣⏣࢞ࣔࣤࣂࢪහࠈ㸝᩺₪ᕰ୯ኳ༇᪣⏣㏳ 1㸞 ⬳◂✪ᡜ⤣ྙ⬳ᶭ⬗◂✪ࢬࣤࢰ࣭6Fࠈࢬ࣐ࢻ࣭࣭࣌ࣜ ࠈ ┘ḗ ࣈࣞࢡ࣑ࣚ࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬3-4 ࣭࣋ࢩ ୌ⯙ⁿ㢗ᢊ㘋࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬5-8 ࣭࣋ࢩ ࢨࣤ࣎ࢩ࣑ⁿ㢗ᢊ㘋࣬࣬࣬࣬9-12 ࣭࣋ࢩ ≁ืㅦⁿᢊ㘋࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬࣬13-14 ࣭࣋ࢩ 2 ᖲᠺ 20 ᖳᗐࠈ᩺₪⏍Ꮥ᠋リఌࣈࣞࢡ࣑ࣚ 㸯ᖲᠺ 20 ᖳ 6 ᭮ 21 㸝ᅰ㸞13:00̿ ሔᡜ㸯᩺₪ኬᏕ᪣⏣࢞ࣔࣤࣂࢪහࠈ ⬳◂✪ᡜ⤣ྙ⬳ᶭ⬗◂✪ࢬࣤࢰ࣭6F ࢬ࣐ࢻ࣭࣭࣌ࣜࠈ㸝᩺₪ᕰ୯ኳ༇᪣⏣㏳ 1㸞 㸝Ⓠ⾪⩽ࡢୖ⥲㸞 13:00-13:05 㛜ఌࡡ㎙ࠈ ༎ᔋࠈ㐠ᘧ [᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬ฦᏄ⣵⬂ᶭ⬗Ꮥ] 13:05-13:53 ୌ⯙ㅦⁿ㸝㸩㢗㸰ⁿ㢗࡛ࡵⓆ⾪ 10 ฦࠉゞㄵ 2 ฦ㸞 ᗑ㛏㸯⧂⏛ࠈපක [᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌]㸰ᇷ⡷ࠈ ᜇይ [᩺₪ኬᏕ⮤↓⛁Ꮥ⣌] 1. ࢆᢒโ㐿ఎᏄ Rit1/Bcl11b ࡡ T ⣵⬂ฦ࡞࠽ࡄࡾᙲ ᗀ℡ ူྍ 㸝᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬ฦᏄ⏍∸Ꮥ㸞 2. ⣵⬂⭯⺦Ⓣ㈻ ADAM2 ࡞ࡻࡽโᚒࡈࡿࡾࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິ ᮟ℡ ┷ୌ 1), Chunghee Cho 2), Judith M. White 3), Alan F. Horwitz3) (1) ᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌㹺ⷾ⌦Ꮥ; 2) Dept Life Sci, Gwangju Inst Sci & Technol; 3) Dept Cell Biol, Univ Virginia Sch Med) 3. ỀᬏᣲິᏄ࣏ࢠࣞࣁࣚࣤࢪἪ࡞ࡻࡾࣈࣞࢷ࣭ࢭ࣬ࣈࣞࢷ࣭ࢭࣤࣃࣄࢰ࣭ฦᏄ㛣 ┞பష⏕ࡡよᯊ ࠈᩢ⸠ࠈⱝୌ 1)ࠉ➗ཋࠈொ 1)ࠉ୴ᐋࠈ⠂ᙢ 1)ࠉୖᮟࠈ㞖ெ 2)㸝1)᩺₪ᕝ⛁ኬᏕኬᏕ㝌࣬⏍∸ ᏕᕝᏕࠉ2㸞㛏ᒱᢇ⾙⛁ᏕኬᏕᕝᏕ㒂࣬⏍∸⣌㸞 4. ධ⮤ິࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ࢨࢪࢷ࣑ࡡ㛜Ⓠ ࠈᒷ℡ ⏜ࠉᇷ⡷ ᜇይ (᩺₪ኬᏕ⮤↓⛁Ꮥ⣌࣬᭯ᶭ∸㈻Ꮥ) 13:53-14:00 ఆ៹ 14:00-15:40 ࣐ࢼࢨࣤ࣎ࢩ࣑ࠔࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࠕ㸝㸩㢗㸰Ⓠ⾪ࡢゞㄵ㎲ࡲ࡚ 25 ฦ㸞 ᗑ㛏㸯༎ᔋ 㐠ᘧ [᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌]ࠉྚ⏛ࠈ ㇇ [᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌] 1. ㈻㔖ฦᯊゝࢅ⏕࠷ࡒ⥑⨮Ⓩよᯊ㸯㝀⏲࡛ᣦᡋ ྚ⏛ࠈ㇇㸝᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬⭀◂ᵋ㏸⌦㸞 2. ⣵⬂හࣛࣤ㓗ࡡኬぞᶅᏽ㔖よᯊࠤࢨࢡࢻࣜఎ㐡ࡡධమാࡡよ᪺ࢅ┘ᣞࡊ࡙ࠤ ᮿᮇࠈ㞖オ㸝ஐᕗኬᏕ⏍మ㜭ᚒ༈Ꮥ◂✪ᡜ࣬ฦᏄⓆ⌟โᚒᏕ㸞 3. ࣛ࣍ࢽࢠ࢛ࣝࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ㸯LC-MS ࢅᇱ┑࡛ࡊࡒฦᏄ RNA ྜྷᏽἪࡡ㛜Ⓠ ⏛ᒱࠈ㸝㤫㒌ኬᏕ᮶ாኬᏕ㝌⌦ᕝᏕ◂✪⛁࣬ฦᏄ∸㈻Ꮥ㸞 4. ᠺ㛏ළ㗱ࡡࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ࡛ᶭ⬗よᯊ 㔕పࠈ⣪ᗀࠉ༎ᔋࠈ 㐠ᘧ㸝᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬ฦᏄ⣵⬂ᶭ⬗Ꮥ㸞 15:40-15:50 ఆ៹ 3 15:50-17:10 ≁ืㅦⁿ㸝2 㢗㸰Ⓠ⾪ࡢゞㄵ㎲ࡲ࡚ 40 ฦ㸞 1㸣≁ืㅦⁿ I. ᩺₪ࢣࢿ࣑ࢰࣅࣤࢡࢬࣤࢰ࣭ࡡὩິ 㔕ࠈⰃࠈ㸝᩺₪ኬᏕ⬳◂✪ᡜ࣬遺伝子機能解析学） 㸝ᗑ㛏㸯ᮄ༞ࠈࠈ[᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌]㸞 2㸣≁ืㅦⁿ II. ♼⤊⣵⬂ࡡኣᵕᛮ⋋ᚋࡡࡒࡴࡡฦᏄᡋ␆ ᫅㔕ࠈᖷ㞕㸝ᅗ❟⢥♼࣬♼⤊ࢬࣤࢰ࣭♼⤊◂✪ᡜ࣬チ᩷◂✪㒂㸞 㸝ᗑ㛏㸯༎ᔋࠈ㐠ᘧࠈ[᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌]㸞 17:10 Ѹ 17:15 㛚ఌࡡ㎙ࠈ ༎ᔋࠈ㐠ᘧ [᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬ฦᏄ⣵⬂ᶭ⬗Ꮥ] 17:20-19:00 ᠋ばఌ㸝᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⥪ྙ㝌Ჯ 12F ⫃ဤ㣏ᇸ㸞 4 ࢆᢒโ㐿ఎᏄ Rit1/Bcl11b ࡡ T ⣵⬂ฦ࡞࠽ࡄࡾᙲࠈ㸝ୌ⯙ⁿ㢗 1㸞 ᗀ℡ ူྍ ᩺₪ኬᏕኬᏕ㝌ࠈ༈ṉᏕ⥪ྙ◂✪⛁ฦᏄ⏍∸Ꮥฦ㔕 ࢆᢒโ㐿ఎᏄ Bcl11b/Rit1 ࡢࠉT ࣛࣤࣂ⣵⬂ࡡิṹ㝭࡞࠽࠷࡙β-selection ࡷ positive selection ࡞ᚪ㡪࡚࠵ࡾࠊࡊ࠾ࡊࠉࡐࡡᚃࡡฦṹ㝭ࡷᮆᲀ࡚ࡡᙲࡢ᪺࡚࠵ࡖࡒࠊᅂࠉ ን␏ཋࡡᢖ࡞ࡻࡽ Rit1/Bcl11b ን␏࣏ࢪࢅష⿿ࡊࠉよᯊࡊࡒ࡛ࡆࢀࠉ Bcl11b/Rit1 㐿 ఎᏄ⣵⬂㝸ᐐᛮ T ࣛࣤࣂ⣵⬂ฦࠉቌṢࡷ CD8a㐿ఎᏄⓆ⌟࡞ࡵ㛭ࡊ࡙࠷ࡾࡆ࡛♟ ြࡈࡿࡒࠊ 5 ⣵⬂⭯⺦Ⓣ㈻ ADAM2 ࡞ࡻࡽโᚒࡈࡿࡾࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິ（一般演題 2） ᮟ℡ ┷ୌ 1), Chunghee Cho2), Judith M. White3) and Alan F. Horwitz3) 1) ᩺₪ኬᏕኬᏕ㝌༈ṉᏕ⥪ྙ◂✪⛁㸝༈Ꮥ㒂㸞•ⷾ⌦Ꮥฦ㔕 2) Department of Life Science, Gwangju Institute of Science and Technology 3) Department of Cell Biology, University of Virginia School of Medicine Ⴁ⌣⛛ິࡌࡾࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡢࠉഁ⬳ᐄ࿔ᅑ࠾ࡼrostral migratory stream (RMS) ࢅ⤊࡙Ⴁ⌣ࡡ୯ኳ㐡ࡌࡾࠊࡆࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິࡢࠉࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ࿔ᅑ ࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ࡛りࡊࡼ⛛ິࡌࡾ㏻㙈⛛ິࡡᵕᘟࢅ࡛ࡾ࡛⩻࠻ࡼࡿ࡙࠷ࡾࠉ ࡐࡡレ⣵ฦᏄᶭᵋࡢ᪺࡚࠵ࡾࠊ⚶㐡ࡢࠉ⭯⺦Ⓣ㈻࡚࠵ࡾADAM2ࡡⓆ⌟ࢅ⛛ິ୯ࡡRMS ࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ࡞ぜฝࡊࡒࡡ࡚ࠉࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິ࡞࠽ࡄࡾADAM2ࡡᶭ⬗ࢅ᳠ ゞࡊࡒࠊ ADAM2ࢿࢴࢠࢹ࣏ࢪ㸝KO㸞ࡡႡ⌣ࡢ⏍ᚃ0࡞࠽࠷࡙ࠉ㔕⏍ᆵ࣏ࢪ㸝WT㸞 ࡡࡐࡿࡻࡽࡵᑚࡈࡂࠉRMSࡡమ✒ࡵྼഁ࡞࠽࠷࡙WT࡞Ẓ㍉ࡊ࡙ᑚࡈ࠾ࡖࡒࠊBrdUᵾㆉ ࡞ࡻࡽKOࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິ㏷ᗐࡢWT࡞Ẓ㍉ࡊ࡙΅ᑛࡊ࡙࠷ࡾࡆ࡛♟ࡈࡿࡒࠊ ᭞࡞⬳ࢪࣚࢪࢅ⏕࠷࡙ࠍࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິࢅ├࡞ふᐳࡊࡒ࡛ࡆࢀࠉKO࡚ ࡢ⛛ິ㏷ᗐࡡ΅ᑛ࠵ࡽࠉ⛛ິࡡ᪁ྡྷᛮࡿ࡙࠷ࡾࡆ࡛᪺ࡼ࠾࡞ࡖࡒࠊWT࠽ࡻࡦKO ࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࢅ࣏ࢹࣛࢣࣜහ࡚ᇰ㣬ࡌࡾ࡛ࠉWT⏜ᮮࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡢ㏻㙈⛛ ິࢅ♟ࡊࡒࠉKOࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡢ㏻㙈ࢅᙟᠺࡌࡾࡆ࡛ࡂࠉ༟≺࡚ࠉࡊ࠾ࡵࡻࡽ ⥾ࡷ࠾㏷ᗐ࡚⛛ິࢅࡌࡾࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹኬ㒂ฦ࡚࠵ࡖࡒࠊKO࡞࠽࠷࡙ふᐳࡈࡿࡒ ࡆࡡ⾪⌟ᆵࡢࠉADAM2ࡡᶭ⬗㜴ᐐ࣋ࣈࢲࢺࢅ⬳ࢪࣚࢪ࡞㐲⏕ࡊࡒሔྙ࡞ࡵヾࡴࡼࡿࡒࠊ ࡱࡒࠉKOࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࢅWTࡡࢪࣚࢪ୕࡚⛛ິࡈࡎࡒሔྙࠉWTࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ ࢅKOࡡࢪࣚࢪ୕࡚⛛ິࡈࡎࡒሔྙࡐࡿࡑࡿ࡞ࠉࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡡ⛛ິ㏷ᗐࡡ΅ᑛ࡛ ⛛ິ᪁ྡྷࡡࡿふᐳࡈࡿࡒࡆ࡛࠾ࡼࠉADAM2㐿ఎᏄࡡን␏ࡢࠍࡡࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ ࡡ⛛ິࡓࡄ࡚ࡂࠉࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ⛛ິࡌࡾRMS⎌ሾ࡞ࡵᙫ㡢ࡊ࡙࠷ࡾࡆ࡛ࢂ࠾ࡖ ࡒࠊ ࡆࡿࡼࡡ⤎ᯕ࠾ࡼࠉADAM2ࡢࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ-ࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹ㛣ࠉࡱࡒࡢࢼࣖ ࣭ࣞࣇࣚࢪࢹ࡛ࡐࡡ⛛ິ⎌ሾ㛣ࡡ┞பష⏕࡞㔔さᙲࢅᯕࡒࡊࠉࢼ࣭ࣖࣞࣇࣚࢪࢹࡐ ࡡ┘Ⓩᆀ࡛ྡྷ࠾࠹ࡒࡴࡡ᪡࠷⣵⬂⛛ິࢅྊ⬗࡞ࡊ࡙࠷ࡾ࡛⩻࠻ࡼࡿࡒࠊ 6 ỀᬏᣲິᏄ࣏ࢠࣞࣁࣚࣤࢪἪ࡞ࡻࡾࣈࣞࢷ࣭ࢭ࣬ ࣈࣞࢷ࣭ࢭࣤࣃࣄࢰ࣭ฦᏄ㛣┞பష⏕ࡡよᯊ㸝ୌ⯙ⁿ㢗 3㸞 ᩢ⸠ࠈⱝୌ㸦ࠉ➗ཋࠈொ㸦ࠉ୴ᐋࠈ⠂ᙢ㸦ࠉୖᮟࠈ㞖ெ㸧 㸦 ᩺₪ᕝ⛁ኬᏕኬᏕ㝌࣬⏍∸ᏕᕝᏕࠉ㸧㛏ᒱᢇ⾙⛁ᏕኬᏕᕝᏕ㒂࣬⏍∸⣌ ࠈ ࠈࠈࠈࠈࠈ ⏍మ∸㈻࠽ப࠷࡞ヾㆉ⤎ྙࡊ࠵࠹ࡆ࡛࡞ࡻࡽኣࡂࡡ⏍⌟㇗ႜࡱࡿࡾࠊฦᏄヾㆉࡡ ⤄ྙࢂࡎౚ࡛ࡊ࡙ࠉ㓕⣪_ᇱ㈻ࠉ㓕⣪_㜴ᐐࠉᢘཋ_ᢘమࠉ࣓࣌ࣜࣤ-ࣝࢬࣈࢰ࣭ࠉࣝࢠ ࢲࣤ_⢶㙈ࠉDNA_DNA(ࡱࡒࡢ RNA)࠵ࡾࠊฦᏄヾㆉᶭ⬗ࢅỀᬏᣲິᏄ(QCM)ࡡ⾪ 㟻࡞ᅖᏽࡌࡿࡣࠉᅖᏽࡈࡿࡒᶭ⬗࡞ヾㆉࡈࡿࡾ∸㈻ࡡ∸⌦ᏕⓏᛮ㈻ࢅฦᯊࡌࡾࡆ࡛ ྊ⬗࡛ࡾࠊฦᏄヾㆉᶭ⬗ࢅങ࠻ࡒ QCM ࡢࣅࢤࢡ࣑ࣚࣝ࣊ࣜࡡ㔔㔖ንࢅ࿔ἴᩐን ࡛ࡊ࡙ᤂ࠻ࡾࡆ࡛࡚ࡀࠉ༈⒢ࠉ⎌ሾࠉỀ⏐ࠉ㣏ဗࡡᖕᗀ࠷ฦ㔕࡚ỏ⏕ࡈࡿࡾࡆ࡛ ᙽࡈࡿ࡙࠷ࡾࠊᠻࠍࡢ QCM ゝῼᶭࢅషᠺࡊࠉ⮤షᶭࢅ⏕࠷࡙ࣈࣞࢷ࣭ࢭ࡛ࣈࣞࢷ ࣭ࢭࣤࣃࣄࢰ࣭ࡡฦᏄ㛣┞பష⏕ࢅよᯊࡊࡒࡡ࡚ሒ࿈ࡌࡾࠊ ᮞᩩ࡛᪁Ἢ㸯ࠈ⾪㟻࡞㔘ⵠ╌᪃ࡈࡿ࡙࠷ࡾ 21 MHz ࡡ QCM ࢅࢦࣤࣚࢫᕝᴏᰬᘟఌ ♣㸝᩺₪┬⣊㨮ᕖᕰ㸞ࡻࡽථᡥࡊࡒࠊQCM ࢲࢴࣈࡡ㔘⾪㟻ࢅ 16 mM ࢨࢪࢰ࣐ࣤỀ⁈ᾦࠉ 1 mM ࢩࢲ࢛ࣄࢪỀ⁈ᾦࠉ1 mM 11-࣐ࢿ-1-ࣤࢸ࢜ࣤࢲ࢛࣭ࣜỀ⁈ᾦࡱࡒࡢ 1 mM ࢜ࣜ ࣍࢞ࢨ-EG6-ࣤࢸ࢜ࣤࢲ࢛࣭ࣜỀ⁈ᾦ࡞ 1 㛣ᾈ₍ࡌࡾࡆ࡛࡞ࡻࡽ⮤ᕤ⤄⧂༟ฦᏄᒒ (SAM) ࢅᙟᠺࡊࡒࠊḗ࠷࡚ࠉ0.02 mg/ml ࡡࣈࣞࢷ࣭ࢭࣤࣃࣄࢰ࣭⁈ᾦ࡛ 0.2 mg/ml ࡡ 㹃-ࢨࢠࣞࣉ࢞ࢨࣜ-㹃’-(2-࣓ࣜ࣌ࣛࢿ࢙ࢲࣜ) ࢜ࣜ࣍ࢩ࣐ࢺ࣒ࢹ-㹥-ࢹ࢙ࣜࣤࢪࣜ࣌ࣤ㓗 ሲ(CMC) ⁈ᾦࡡ➴㔖Ίྙ⁈ᾦ࡞ QCM ࢲࢴࣈࢅ 2 㛣ᾈ₍ࡊࠉ࣭࣏࣍ࣤ࣬ࣁ࣭ࢠࣤࣃࣄ ࢰ࣭㸝BBI㸞ࠉኬ㇃ࢹࣛࣈࢨࣤࣤࣃࣄࢰ࣭(STI㸞ࠉ༵Ⓣࢨࢪࢰࢲࣤ(EWC㸞ࢅᅖᏽࡊࡒࠊ ࣤࣃࣄࢰ࣭ᅖᏽࡈࡿ࡙࠷ࡾ QCM ࢲࢴࣈࢅ 100 mM ࢹࣛࢪ⥾⾢ᾦ(pH 8)ࡱࡒࡢ 100 mM ࣛࣤ㓗⥾⾢ᾦ(pH 6.8)୯࡞ᾈ₍ࡈࡎࠉࣈࣞࢷ࣭ࢭ⁈ᾦ (0.1 mg/ml) ࢅ 100㸡100㸡300㸡 600㸡600㸡600 _l ࡍࡗ㏪ḗⓏ࡞῟ຊࡊࠉQCM ࡞ᅖᏽࡈࡿࡒࣈࣞࢷ࣭ࢭࣤࣃࣄࢰ࣭࡛ ࣈࣞࢷ࣭ࢭ࡛ࡡ⤎ྙ㣤ࡌࡾࡱ࡚࿔ἴᩐንࢅ㏛㊟ࡊࡒࠊよ㞫ᏽᩐ Kd 㸝⤎ྙᏽᩐࡡ㏣ ᩐ㸞ࡢᒱ⏷ࡼࡡ᪁Ἢ࡞ᚉ࠷⟤ฝࡊࡒࠊ ⤎ᯕ࡛⩻ᐳ㸯ࠈQCM ⾪㟻࡞ᅖᏽࡈࡿࡒࣤࣃࣄࢰ࣭ࡡࣈࣞࢷ࣭ࢭ࡞ᑊࡌࡾ Kd ࢅῼ ᏽࡊࡒ࡛ࡆࢀࠉࢹࣛࣈࢨࣤ-BBI, ࣓࢞ࢹࣛࣈࢨࣤ-BBI, ࢹࣛࣈࢨࣤ-STI 㛣ࡡ Kd ࡢࡐࡿࡑࡿ 16.1 nM, 9.93 nM, 1.48 nM ࡛⟤ฝࡈࡿࡒ㸣ࡆࡿࡼࡡೋࡢࡐࡿࡑࡿᩝ⊡ೋ࡛ࡻࡂୌ⮬ࡌࡾࡡ࡚ࠉ ࣤࣃࣄࢰ࣭ࡡ㜴ᐐ㒂నᑊᚺࡌࡾࣈࣞࢷ࣭ࢭࡡὩᛮ‹࡛⤎ྙྊ⬗㒼ྡྷ(࢛࢙ࣛࣤࢷ ࣭ࢨࣘࣤ)࡚ QCM ⾪㟻࡞ᅖᏽࡈࡿ࡙࠷ࡾ࡛⩻࠻ࡼࡿࡒࠊୌ᪁ࠉࢨࢪࢰ࣐ࣤࠉ11-࣐ࢿ-1ࣤࢸ࢜ࣤࢲ࢛࣭ࣜࠉࢩࢲ࢛ࣄࢪࠉ࢜ࣜ࣍࢞ࢨ-EG6-ࣤࢸ࢜ࣤࢲ࢛࣭ࣜࡡ SAM ᙟᠺ モ࡚ⷾ EWC ࢅ QCM ⾪㟻࡞ᅖᏽࡊࡒሔྙࠉࣂࣂ࡛ࣤ EWC 㛣࡞࠽ࡄࡾ Kd ࡢࡐࡿࡑࡿ 112.8 nMࠉ116.6 nMࠉ129.4 nMࠉ 205.2 nM ࡛ῼᏽࡈࡿࡒࠊࡆࡿࡼࡡೋࡢ࠷ࡍࡿࡵᩝ⊡ೋ(0.6 fM) ࡞Ẓ㍉ࡊ࡙ࠉࡀࢂࡴ࡙ኬࡀೋ࡚࠵ࡾࡆ࡛ึ᪺ࡊࡒࠊࡆࡡよᯊࢸ࣭ࢰࡢ EWC ฦᏄ හ࡞Ꮛᅹࡌࡾࡗࡡࣂࣂࣤ㜴ᐐ㒂న (9G, 53 QLVSG, 103 PW)ࡡ࠹ࡔࠉ㜴ᐐ㒂నࡡୌ㒂ࡊ࠾ ࣂࣂ࡛ࣤ⤎ྙ࡚ࡀ࠷㒼ྡྷ࡚ EWC QCM ⾪㟻࡞ᅖᏽࡈࡿࡒࡆ࡛ࢅ♟ြࡌࡾࠊ 7 ධ⮤ິࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ࢨࢪࢷ࣑ࡡ㛜Ⓠ 㸝ୌ⯙ⁿ㢗 4㸞 ᒷ℡ ⏜ࠉᇷ⡷ ᜇይ ᩺₪ኬᏕ⮤↓⛁Ꮥ⣌࣬᭯ᶭ∸㈻Ꮥ ㈻㔖ฦᯊ⨠㸝MS㸞ࡡⓆ㐡࡛࡛ࡵ࡞ࠉ࣌ࢪ࣌ࣈࣞࢷ࢛࣭࣑ࡵ MS ࢅ⏕࠷ࡒよᯊ᪁Ἢ Ὦ࡛ࡖ࡙࠷ࡾࠊࡊ࠾ࡊࠉࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡢ㟸ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ࡞ࡻࡾᢒโ࡚࢛ࣤ ࡈࡿ࡞ࡂࡂࠉࡱࡒ⏍మහ࡚ᐁ㝷࡞ࣛࣤ㓗ࡈࡿ࡙࠷ࡾࢰࣤࣂࢠ㈻ࡢୌ㒂࡚࠵ࡾࡆ࡛࠾ࡼࠉ ࢰࣤࣂࢠ㈻Ίྙ∸ࡡࢹࣛࣈࢨࣤฦよ∸ࢅ├ MS ࡚ฦᯊࡊ࡙ࡵࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡢ࡛ࢆ ᳠ฝࡈࡿ࠷ࠊࡐࡡࡒࡴࠉMS ࡡ๑ฌ⌦࡛ࡊ࡙ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡࡲࢅ≁␏Ⓩ࡞ฦ㞫࣬ ⢥⿿ࡌࡾᚪさ࠵ࡾࠊࡐࡆ࡚ᠻࠍࡢࠉࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࢅ≁␏Ⓩ࡞ಕᣚࡌࡾࢲࢰࢼ࢜ࣚ ࣑ࢅ⏕࠷࡙ࠉධ⮤ິࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ࢨࢪࢷ࣑ࡡ㛜Ⓠࢅ⾔ࡖࡒࠊ ᠻࠍࡢࠉ32P ࣚ࣊ࣜࡊࡒ⏍మモᩩࢅ⏕࠷࡙ࠉᚉᮮ࠾ࡼࡻࡂ⏕࠷ࡼࡿ࡙࠷ࡾ IMAC ࣑࢜ࣚ ࡻࡽࡵࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚࡡ࠹ࡻࡽࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡಕᣚງኬࡀ࠷ࡆ࡛ࢅヾࡴࡒࠊୌ ᪁࡚ࠉࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚࡢಕᣚງᙁ࠷ࡒࡴࠉ⏍మモᩩࡡࢹࣛࣈࢨࣤฦよ∸࡞ኬ㔖࡞ྱࡱࡿ ࡾ㟸ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡୌ㒂㟸≁␏Ⓩ࡞ྺ╌ࡊ࡙Ίථࡊࠉࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡ࢛ࣤ ᢒโࡈࡿࡒࠊࡻࡖ࡙ࠉࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚࡢࠉ㟸≁␏Ⓩ࡞ಕᣚࡈࡿࡒ㟸ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࢅ ࠷࠾࡞ཱིࡽ㝎ࡂ࠾࣭࡛࢞ࡾࠊࡐࡆ࡚ࠉᵾ‵ࢰࣤࣂࢠ㈻ࢹࣛࣈࢨࣤᾐ∸ࡡΊྙ∸ࢅ⏕ ࠷࡙ᵕࠍࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚὑὯ᮪௲ࢅ᳠ゞࡊࡒࠊࡐࡡ⤎ᯕࠉࢮࣈࣞࣂࢿ࣭ࣜ࡞ࡻࡾὑὯ 㟸ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡ㝎ཡ࡞᭯ຝ࡚࠵ࡾࡆ࡛ࢅぜฝࡊࡒࠊࢲࢰࢼࢲࢴࣈἪ࡚᭯ຝ࡛ሒ ࿈ࡈࡿࡒ 750 mM ࢹࣛࣆࣞࣞ㓉㓗 / 80 % ࢬࢹࢼࢹࣛࣜ࡞ࡻࡾὑὯࡵࠉ㓗ᛮ࣋ࣈࢲࢺࡡ 㝎ཡ࡞᭯ຝ࡚࠵ࡖࡒࡆ࡛࠾ࡼࠉࡆࡿࡼࢅ⤄ࡲྙࢂࡎ࡙ὑὯ᮪௲ࢅ᭩㐲ࡊࡒࠊࡱࡒࠉࣛࣤ 㓗࣋ࣈࢲࢺࢅࣛࣤ㓗⥾⾢ᾦ࡚ࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚ࠾ࡼ࢛࡚ࣤࣚࣤ⁈ฝࡊ ODS ࣑࢜ࣚ࡞ಕ ᣚࡈࡎࡾ㝷ࠉ㧏ばỀᛮࡡࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺಕᣚࡈࡿ࠷࡛࠷࠹ၡ㢗⏍ࡋࡒࠉࡐࡡཋ ᅄࢅ✲ࡀḾࡴᨭⰃࡌࡾࡆ࡛࡚☔ᐁ࡞ ODS ࣑࢜ࣚ࡞ಕᣚࡈࡎࡒࠊࡐࡡࠉモᩩࡡ๑ฌ⌦࡛ ࡊ࡙࣎ࣛࢪࢲࣝࣤ⣌㏣┞࣑࢜ࣚࢅ⤄ࡲ㎲ࡳ➴ࠉࡈࡱࡉࡱᨭⰃࢅ⾔࠷ࠉධ⮤ິࣛࣤ㓗࣋ ࣈࢲࢺ⢥⿿ࢨࢪࢷ࣑ࢅᵋ⠇ࡊࡒࠊࡐࡊ࡙ࠉࡆࡡ᪁Ἢࢅࣆࣛ࢜ࢵ࣒࢙༵࢝ࣜฦฝᾦ ࡡࢹࣛࣈࢨࣤฦよ∸࠾ࡼࡡࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡ⢥⿿࡞㐲⏕ࡊࡒ⤎ᯕࠉ501 ⛸㢦ࡡࣛࣤ㓗 ࣋ࣈࢲࢺࢅ MALDI-TOF-MS ࡚᳠ฝࡊࡒࠊࡆࡡ࡛ࡀࡡࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ᗐࡢ 85 %࡚ ࠵ࡖࡒࠊ ௧୕ࡻࡽࠉ⏍మモᩩ࡞㐲⏕ྊ⬗ධ⮤ິࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ࢨࢪࢷ࣑ࢅ☔❟࡚ࡀࡒࠊ ࡆࡡࢨࢪࢷ࣑ࡢࠉࣈࣞࢷ࣭ࢭฌ⌦ࡊࡒモᩩࡈ࠻‵ങࡌࡿࡣࠉ࣎ࣛࢪࢲࣝࣤ⣌㏣┞࣑࢜ࣚ ࡚ࡡ๑ฌ⌦ࠉࢲࢰࢼ࣑࢜ࣚࡡ࣋ࣈࢲࢺΊྙ∸࠾ࡼࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺࡡฦ㞫࣬⢥⿿ࠉODS ࣑࡚࢜ࣚࡡࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺฦ㞫ࢅධ⮤ິ࡚⾔࠹ࡆ࡛࡚ࡀࡾࠊᚃ LC-MS ࡛⤄ࡲྙࢂ ࡎࡾࡆ࡛࡞ࡻࡽࠉࡈࡼࡾࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺྜྷᏽᩐࡡቌຊぜ㎲ࡱࡿࡾࠊ 8 ࢨࣤ࣎ࢩ࣑ࠔࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࠕ 1. ㈻㔖ฦᯊゝࢅ⏕࠷ࡒ⥑⨮Ⓩよᯊ㸯㝀⏲࡛ᣦᡋ ྚ⏛ࠈ㇇ ᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬⭀◂✪᪃スᵋ㏸⌦Ꮥฦ㔕 ㈻㔖ฦᯊゝࢅ⏕࠷ࡒࢰࣤࣂࢠ㈻よᯊࡡ㣍㌅Ⓩᢇ⾙㠁࡛᩺ࣃࢹࢅࡢࡋࡴ࡛ࡌࡾኣࡂࡡ⏍ ∸⛸ࡡࢣࢿ࣑㒼าࡡࢸ࣭ࢰ࣭࣊ࢪ࡞ࡻࡽࠉᚉᮮ࡚ࡢ⩻࠻ࡼࡿ࠾ࡖࡒࣀࢪ࣭ࣜࣈࢴࢹ ࢰࣤࣂࢠ㈻ྜྷᏽྊ⬗࡞ࡽࠉ᩺ぞࣁ࢛࣏࣭࣭࢜ࠉ⑄ᝀ㛭㏻ࢰࣤࣂࢠ㈻ࠉ⒢ᵾⓏࢰ ࣤࣂࢠ㈻Ⓠぜࡡ᭯ງᡥἪ࡛ࡊ࡙ࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪよᯊኬࡀᙽࢅ㞗ࡴ࡙࠷ࡾࠊࡊ࠾ࡊ ࡼࠉࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ◂✪ୠ⏲Ⓩ࡞ᗀࡽጙࡴࡒࡡࡢᐁ㝷࡞ࡢ࠽ࡻࡐ 5 ᖳࡱ࠻࠾ࡼ࡚ ࠵ࡽࠉṌྍⓏ✒࠷࡛࠷࠹Ⅴࢅ⩻៎ࡊ࡙ࡵࠉࣈࣞࢷ࢛࣭࣑よᯊ࠾ࡼࡡ⮣ᗃᚺ⏕ྊ ⬗ࣁ࢛࣏࣭࣭࢜࣬⑄ᝀ㛭㏻ࢰࣤࣂࢠ㈻ࡡⓆぜࡢᑛ࠷࡛࠷ࢂࡉࡾࢅᚋ࠷ࡡ⌟≟࡚ ࠵ࡾࠊ ࡆࡡཋᅄ࡛ࡊ࡙ࠉࡆࡿࡱ࡚ࡡ◂✪㈻㔖ฦᯊゝ࡞ࡻࡾࢰࣤࣂࢠ㈻ࡡ⥑⨮Ⓩよᯊࡡ㝀⏲ࢅ ណㆉⓏ࠵ࡾ࠷ࡢ↋ណㆉⓏ࡞㍇っࡊࠉࡐࡡよᯊ⬗ງ࡞㐛ᙽࢅࡵࡖ࡙࠷ࡒࡆ࡛ᣞᦤ࡚ ࡀࡾࠊ㈻㔖ฦᯊゝࢅ⏕࠷ࡒ⥑⨮Ⓩよᯊࡡ㝀⏲ࡢࡆࡿࡱ࡚ࡵᣞᦤࡈࡿ࡙ࡀࡒࡆ࡛࡚ࡵ࠵ࡾࠉ ᨭࡴ࡙ᩒ⌦ࡊ࡙ࡲࡾ࡛௧ୖࡡ 3 Ⅴ࡞さ⣑࡚ࡀࡾࠊ 1) ᑊ㇗䛮 䛰䜑 モᩩ䟺 ⾉ₚ䚮 ⾉ΰ䚮 ᑺ䚮 ⬳⬠㧂ᾦ䛰䛯 䛴మᾦ䚮 ᡥ⾙䛱䜎 䜐 ᦤฝ䛛 䜒䛥⤄⧂䚮 ⏍᳠モᩩ䟻 䛴⃨ᗐ⠂ᅑ䟺 䝄 䜨 䝎䝣 䝇 䜳 䝰 䝷 䜼 䟻 䛒ᗀ䛕 䟺 107-1010 䟻䚮 䛣 䜒䛱Ẓ㍉䛝 䛬 ⌟ ᅹථᡥྊ⬗䛰㧏ᛮ⬗㈻㔖ฦᯊゝ䛴䝄 䜨 䝎䝣 䝇 䜳 䝰 䝷 䜼 䟺 䛐䜎 䛣 104䟻 䛒≻䛕 䚮 ᴗ䜇䛬 ⃨ᗐ䛭 䛈 䜑 䛙 䛮 䛒䛛 䜒䜑 䝔䜨 䜮䝢 䞀䜯 䞀䝿 ⑄ᝀ㛭㏻䝃 䝷 䝕䜳 ㈻䛴ྜྷᏽ䛒ᅏ㞬䛭 䛈 䜑䛙䛮 䚯 2) 㧏⃨ᗐ䛮 ⃨ᗐ䛴䝃 䝷 䝕䜳 ㈻䝿 䝞䝛 䝅䝍 䛒භᏋ䛝 䛥 ሔྙ䚮 ESI 䛰 䛯 ᗀ䛕 ฺ⏕䛛 䜒䛬 䛊 䜑 䜨 䜮 䝷 Ἢ䛱䛐䛊䛬 䚮 ⃨ᗐ䛴䝃 䝷 䝕䜳 ㈻䝿 䝞䝛 䝅䝍 䛴䜨 䜮 䝷 䛒ᢒโ䛛 䜒䜑 ⌟㇗ (ion supression)䚯 3) ⥑⨮Ⓩよᯊ䛱ኣ䛕 ฺ⏕䛛 䜒䛬䛊䜑 LC-MS/MS Ἢ䛭䛵ᵾⓏ䜨 䜮䝷 䛴㐽ᢝ䛒䝭 䝷 䝄䝤 䛱㉫ 䛙 䜐 䚮 ≁䛱⃨ᗐ䛴䝃 䞀䜶䝇 䝌 䜨 䜮 䝷 䛒㐽ᢝ䛭 䛓 䛰 䛑 䛩 䛥 䜐 䚮 1 ᅂ䛴よᯊ䛴䜅䛭䛵ྜྷ ᏽ䛭䛓 䛰䛊䝃 䝷 䝕䜳 ㈻䛴Ꮛᅹ䛒↋っ䛭䛓 䛰䛊䛙 䛮 䚯 ࠈᮇⓆ⾪࡚ࡢࠉࡆࡿࡼࡡ㝀⏲ࢅよᾐࡌࡾࡒࡴࡡ⌟ᅹࡡࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪよᯊᢇ⾙ࡡ⌟≟࡞ࡗ ࠷࡙⩻ᐳࡌࡾ࡛࡛ࡵ࡞ࠉ⌟ᅹᠻࠍཱིࡽ⤄ࢆ࡚࠷ࡾࣃࢹ⭀⣊⌣మࡡ⥑⨮Ⓩよᯊ࡞ࡗ࠷࡙ࡆ ࡿࡱ࡚ࡡ◂✪ᠺᯕࢅሒ࿈ࡌࡾࠊࡱࡒࠉ࠵ࢂࡎ࡙ࠉ⭀⏍᳠モᩩ࠾ࡼ laser microdissection (LMD)Ἢ࡞ࡻࡽวࡽฝࡊࡒ⣊⌣మว∞ࡡᑊ㇗࡛ࡊࡒ࣏ࢠࣞ࣬ࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪよᯊࡡ⌟≟ ࡞ࡗ࠷࡙ࡵ⣺ࡌࡾᏽ࡚࠵ࡾࠊ 9 ࢨࣤ࣎ࢩ࣑ࠔࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࠕ 2. ⣵⬂හࣛࣤ㓗ࡡኬぞᶅᏽ㔖よᯊ ࠤࢨࢡࢻࣜఎ㐡ࡡධమാࡡよ᪺ࢅ┘ᣞࡊ࡙ࠤ ᮿᮇࠈ㞖オ ஐᕗኬᏕ⏍మ㜭ᚒ༈Ꮥ◂✪ᡜࠈ ฦᏄⓆ⌟โᚒᏕฦ㔕 ᒌវ㜭ᚒ◂✪ࢬࣤࢰ࣭(GCOE ࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࢬࣤࢰ࣭) ࢣࢿ࣑⛁ᏕࡡⓆᒈ࡞ࡻࡖ࡙ᚋࡼࡿࡒሒࢅᇱ┑࡛ࡊ࡙ࠉࢹࣚࣤࢪࢠࣛࣈࢹ࣭࣑よᯊࡷࣈ ࣞࢷ࢛࣭࣑よᯊ࡞⾪ࡈࡿࡾ⥑⨮ⓏよᯊἪ┊ࢆ࡞⾔ࢂࡿ࡙࠷ࡾࠊ≁࡞㎾ᖳ᛬㏷࡞Ⓠ㐡ࡊ ࡒ㈻㔖ฦᯊゝࢅ⏕࠷ࡒࣈࣞࢷ࢛࣭࣑よᯊࡢࢰࣤࣂࢠ㈻ࡡⓆ⌟㔖ሒ࡞ຊ࠻࡙ࠉࡈࡱࡉࡱ ⩳ゼᚃಞ㣥ሒࢅ࠻ࡾࠊࢰࣤࣂࢠ㈻ࡡࣛࣤ㓗ࡢ⣵⬂හࢨࢡࢻࣜఎ㐡࡞࠽࠷࡙᭩ࡵ㔔さ ⩳ゼᚃಞ㣥ࡡୌࡗ࡚࠵ࡾࠊࡆࡿࡱ࡚࡞ᵕࠍࣈࣞࢷࣤ࢞ࢻ࣭ࢭࡡ⏍∸ᏕⓏ㔔さᛮ♟ ࡈࡿ࡙ࡀࡒࠉࡐࡡ⏍⌦Ⓩᇱ㈻༎ฦ࡞ྜྷᏽࡈࡿ࡙࠷ࡾࡵࡡࡢណአ࡞ᑛࡂࠉࣤࣈࢴࢹ 㸝⣵⬂አๆ⃥㸞࡛ࢹࣈࢴࢹ㸝⣵⬂ᚺ➽㸞࡛ࡡ㛣࡞౪↓ኬࡀࣇࣚࢴࢠ࣍ࢴࢠࢪ Ꮛᅹࡌࡾࡡ⌟≟࡚࠵ࡾࠊࡆࡡࣇࣚࢴࢠ࣍ࢴࢠࢪࡡ୯㌗ࢅ⌦よࡌࡾࡒࡴ࡞ࡢࠉࠔዯరࡾ ࢰࣤࣂࢠ㈻ࠕࡡࠔࡡ㒂నࠕࣛࣤ㓗ࢅུࡄ࡙࠷ࡾ࠾ࢅ▩ࡾࡆ࡛㸝㸲ࢨࢡࢻࣜఎ㐡ฦᏄ ࡡ࢜ࢰࣞࢡ㸞㔔さ࡚࠵ࡾࠊࡈࡼ࡞ࠉࠔ࠷ࡗࠕࠉࠔࡿࡃࡼ࠷ࠕࣛࣤ㓗ࢅུࡄ࡙࠷ࡾ࠾ ࢅ▩ࡾࡆ࡛ࡢࠉࣛࣤ㓗ࢅࡊࡒࢨࢡࢻࣜఎ㐡ࢾࢴࢹ࣭࣠ࢠࡡࢱࢻ࣐ࢠࢪࢅゝῼࡌࡾࡆ ࡛ࢅណࡌࡾࠊ ࡆࡡࡻ࠹⫴ᬊ࠾ࡼࢂࡿࢂࡿࡢࠉ⣵⬂හࣛࣤ㓗ࡡ⥑⨮Ⓩᏽ㔖よᯊᢇ⾙ࡡ㛜Ⓠ࡞ཱིࡽ ⤄ࢆ࡚ࡀࡒࠊරమⓏ࡞ࡢࠉ㸦㸞㔘ᒌ࢛ࣤᅖᏽࣆࢼࢷ࣭ࢠ࣏ࣞࢹࢡࣚࣆ࣭(IMAC) ࡡᚥᗇⓏ᭩㐲࡞ࡻࡾ㧏⣟ᗐࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⃨⦨Ἢࡡ☔❟ࠉ㸧)SILAC Ἢࡷ iTRAQ Ἢ ࡡᏭᏽྜྷనమᵾㆉἪ࡛ࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲࢺ⢥⿿ᢇ⾙ࡡ⤄ࡲྙࢂࡎ࡞ࡻࡾࣛࣤ㓗࣋ࣈࢲ ࢺࡡንິよᯊἪࡡ☔❟ࠉ㸨)ᚋࡼࡿࡒኬぞᶅࢸ࣭ࢰࢅຝ⋙ࡻࡂよᯊࡌࡾࡒࡴࡡሒฌ⌦ᇱ┑ ࡡᩒങࢅ⾔ࡖ࡙ࡀࡒࠊࡐࡡ⤎ᯕࠉୌᅂࡡよᯊ࡞ࡻࡖ࡙ᩐ༐ࣦᡜࡡࣛࣤ㓗㒂నࡡྜྷᏽ࣬ᏽ 㔖ྊ⬗࡛ࡽࠉࣛࣤ㓗ࢅᣞᵾ࡛ࡊࡒ⣵⬂හࢨࢡࢻࣜఎ㐡ࢾࢴࢹ࣭࣠ࢠິឺよᯊ⌟ᐁ ࢅᖈࡦ࡙ࡀࡒࠊᮇࢨࣤ࣎ࢩ࣑࡚ࡢࢂࡿࢂࡿᵋ⠇ࡊࡒࢨࢪࢷ࣑ࡡᴣさ࡛ࠉࡐࡿࢅฺ⏕ ࡊࡒ⣵⬂࿔ࡷ⣵⬂አๆ⃥౪ᏋⓏࣛࣤ㓗ࡡኬぞᶅよᯊࢅ⣺ࡊࡒ࠷ࠊ 10 ࢨࣤ࣎ࢩ࣑ࠔࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࠕ 3. ࣛ࣍ࢽࢠ࢛ࣝࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ㸯 LC-MS ࢅᇱ┑࡛ࡊࡒฦᏄ RNA ྜྷᏽἪࡡ㛜Ⓠ ⏛ᒱ 㤫㒌ኬᏕ᮶ா ኬᏕ㝌⌦ᕝᏕ◂✪⛁ฦᏄ∸㈻Ꮥᑍᨯ ㎾ᖳࠉRNA ࡷ RNA/ࢰࣤࣂࢠ㈻々ྙమᢰ࠹ኣᙤ⣵⬂ᶭ⬗Ἰ┘ࡈࡿ࡙࠷ࡾࠊࡆࡿࡼ ࡡ RNA ฦᏄࡡኣࡂࡢ๑㥉మ࡚࠵ࡾ㟸ࢤ࣭ࢺ RNA ࡷࢤ࣭ࢺ㡷ᇡࡡࣤࢹࣞࣤ࠾ࡼ⏍ࡋࡾ ࡆ࡛▩ࡼࡿ࡙࠷ࡾࠉ々㞟㌹ᚃಞ㣥ࢅུࡄࡾࡒࡴࠉᐁ㝷ࡡ⣵⬂࡚ᶭ⬗ࡊ࡙࠷ࡾ RNA ࡡ⛸㢦ࡷᵋ㏸ࠉᏋᅹ㔖ࡡレ⣵ࡢṜ▩ࡼࡿ࡙࠷࠷ࠊᮇ◂✪࡚ࡢࠉࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ◂ ✪ࡡࡒࡴ࡞㛜Ⓠࡊࡒ㧏ᛮ⬗ࡡࢨࣘࢴࢹ࢝ࣤよᯊࢨࢪࢷ࣑ࢅ RNA ฦᯊࡡࡒࡴ࡞᭩㐲ࡌࡾ ࡆ࡛࡚ࠉ⏍మ࠾ࡼฦ㞫ࡊࡒ RNA Ίྙ∸ࡷ RNA/ࢰࣤࣂࢠ㈻々ྙమ࡞ྱࡱࡿࡾ RNA ᠺฦࢅ ⥑⨮Ⓩ࡞よᯊ࡚ࡀࡾࠔRNA ࢨࣘࢴࢹ࢝ࣤἪࠕࡡ㛜Ⓠ࡞ྡྷࡄࡒᇱ♇Ⓩ᳠ゞࢅ⾔ࡖࡒࠊࡱ ࡍࠉRNA ࢅ࣎ࣛࢠ࣐ࣛࣜࢺࢣࣜ㞹Ẵὃິ࡚ฦ㞫ࡊࡒᚃ࡞ሲᇱ≁␏Ⓩ RNA ว᩷㓕⣪ ࡚ࢣࣜහᾐࡌࡾ᪁Ἢࢅ᳠ゞࡊࡒࠊࡱࡒࠉฦᏄ RNA ࡡ LC ࡚ࡡฦ㞫᮪௲ࡼࡦ࡞ࢻࢿ LC ࠾ࡼ㉰᚜Ὦ㏷࡚㏞ᾦࡈࡿ࡙ࡂࡾ᚜㔖 RNA ࡡ㈻㔖ฦᯊࡡࡒࡴࡡᏭᏽࡊࡒ࢛ࣤࡡ᪁Ἢ ࡞ࡗ࠷࡙᳠ゞࡊࡒࠊࡈࡼ࡞ࠉࡐࡿࡼࡡ LC-MS/MS よᯊ࡚ᚋࡼࡿࡒ࣏ࢪࢪ࣋ࢠࢹࣜࢅࢠ࢙ ࣭࡛ࣛࡊ࡙ࠉ᩺ࡒ࡞㛜Ⓠࡊࡒ RNA ࢦ࣭ࢲ࢙ࣤࢩࣤ࡞ࡻࡖ࡙ࢸ࣭ࢰ࣭࣊ࢪ᳠⣬ࡌࡾࡆ࡛࡚ࠉ モᩩ୯ࡡ RNA ࢅྜྷᏽࡌࡾࡆ࡛࡚ࡀࡾࡻ࠹࡞ࡖࡒࠊࡆࡿࡼࡡ᪁Ἢ࡚ࠉ㓕ẍ⣵⬂࠾ࡼㄢ ⿿ࡊࡒ tRNA ࡷࣃࢹᇰ㣬⣵⬂⏜ᮮࡡࣛ࣍ࢮ࣭࣑㥉మ࡞ྱࡱࡿࡾさ RNA ࡡྜྷᏽ ࡞ᠺຉࡊࡒࠊ 11 ࢨࣤ࣎ࢩ࣑ࠔࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࠕ 4. ᠺ㛏ළ㗱ࡡࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪ࡛ᶭ⬗よᯊ 㔕పࠈ⣪ᗀࠉ༎ᔋࠈ 㐠ᘧ ᩺₪ኬᏕ༈ṉᏕ⣌࣬ฦᏄ⣵⬂ᶭ⬗Ꮥ ࠈ♼⤊ᠺ㛏ࡊࡒࡽࠉ්⏍ࡌࡾ㝷࡞ࡢ✲㉫ࡡ❻࡞ᠺ㛏ළ㗱࡛࠷࠹㐘ິᛮ࡞ᐣࢆࡓᵋ㏸ࢅ ࡛ࡾࠊࡆࡡᵋ㏸మ࡞ࡢฦᏄ࣒࢜ࢼࢫ࣑ࡢࡻࡂࢂ࠾ࡖ࡙࠷࠷ࠊ≁ᏽࡡฦᏄᠺ㛏ළ㗱ࡡᶭ ⬗࡞㛭౿ࡌࡾࡆ࡛ࢅッ᪺ࡌࡾᡥṹࡢ࠵ࡾࠉᠺ㛏ළ㗱ࡡᶭ⬗ࢅㄕ᪺ࡌࡾฦᏄ⤊㊪ࢅッ᪺ࡌ ࡾࡒࡴ࡞ࡢࠉᇱᮇⓏฦᏄ⩄ᠺ㛏ළ㗱࡚ࡢర࠾ࢅㄢࡾᚪさ࠵ࡾࠊࡆࡡࡻ࠹ふⅤ࠾ ࡼࠉ࠵ࡾ⣌࡞Ꮛᅹࡌࡾ⺦Ⓣ㈻ࢅ⥑⨮Ⓩ࡞ྜྷᏽࡌࡾࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࡡᡥἪࢅ㐲⏕ࡌࡾࡆ࡛࡚ࠉ ࡆࡡၡ㢗ࢅよỬࡌࡾࡆ࡛࡛ࡊࡒࠊᠺ㛏ළ㗱⺦Ⓣ㈻ࢅ 950 ⛸㢦⛤ᗐྜྷᏽࡊࠉࡐࡡ୯࡚ᠺ㛏ළ 㗱࡞᩺ࡒ࡞ぜฝࡈࡿࡒฦᏄ 150 ⛸ࢅඞⰅࡊ࡙㍂⣬࡛ᠺ㛏ළ㗱ࡡࡔࡼ࡞ᙁࡂฦᕱࡌࡾ ࠾ࢅỬᏽࡊࠉᠺ㛏ළ㗱࡞⃨⦨ࡈࡿ࡙࠷ࡾࡵࡡ 90 ⛸㢦ࢅッ᪺ࡊࡒࠊᠺ㛏ළ㗱࡞࠽࠷࡙ࡢࠉ ㏳ᖏࡻࡂ⾔ࢂࡿࡾẒ㍉ࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࡡᡥἪ࠻࠷ࡡ࡚ࠉඞⰅ࡞ࡻࡖ࡙ᙟឺᏕⓏ ࡞ࠉࡻࡽ⃨⦨ࡈࡿ࡙࠷ࡾฦᏄࢅッ᪺ࡊࡒࢂࡄ࡚࠵ࡾࠊࡱࡒࡆࡡ⤎ᯕࠉ୕オࡡ 150 ⛸㢦ࡡ୯ ࡚㸡false-positive ࡛ᛦࢂࡿࡾฦᏄࡢ 1 ௲ࢅぜฝࡎ࠾ࡖࡒࠊࡻࡖ࡙ࠉᮇ◂✪࡚ᚋࡼࡿࡒࣈ ࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࢸ࣭ࢰࡢᴗࡴ࡙ಘ㢏ᛮ࠘≁␏ᛮ࠙ࡡ㧏࠷࡚࠵ࡾࡆ࡛ッ᪺ࡈࡿࡒࠊ ࠈࡆࡿࡼࢅࣛࢮ࣭ࢪ࡛ࡊ࡙ࠉࡡࡻ࠹◂✪ྊ⬗࡚࠵ࢀ࠹࠾㸴ࢂࡿࢂࡿࡢ୕オࡡ 90 ⛸ 㢦⛤ᗐࡡ࠹ࡔࠉᑙථຝ⋙ࡡ࠷♼⤊⣵⬂࡞㐲⏕࡚ࡀࡾ RNAi よᯊἪࢅ㛜Ⓠࡊ࡙ᐁ᪃ࡊࠉࡐ ࡡ࠹ࡔࡡ 15 ⛸㢦⛤ᗐ♼⤊ᠺ㛏࡞├㛭౿ࡌࡾࡆ࡛ࢅッ᪺ࡊࡒࠊࡌࢂࡔࠉࡆࡿࡼ♼ ⤊ᠺ㛏ࡡฦᏄ࣏࣭࣭࢜ࠉࡌࢂࡔᶭ⬗Ⓩᠺ㛏ළ㗱ࡡ࣏࣭࣭࢜ฦᏄ࡚࠵ࡾࡆ࡛ࢅよ᪺ࡊࡒࠊ ௧୕ࢅࡱ࡛ࡴࡾ࡛ࠉ♼⤊⣌࡚ࡡࣈࣞࢷ࢛࣐ࢠࢪࡡ⤎ᯕࡢࠒᙔ↓ࡢ࠵ࡾࠓࠉ♼⤊⛁Ꮥ࡚⏕ ࠷ࡼࡿ࡙࠷ࡾฦᏄ⣵⬂⏍∸ᏕⓏᡥἪ࡛⤎ࡦࡗ࠷࡙ิࡴ࡙ࠉ᭯ຝᡥṹ࡚࠵ࡾ࡛࠷࠻ࡾࠊ ᅂࡢࠉࡆࡿ௧አ࡞ࡵ୕オࡡࢸ࣭ࢰࢅࡖ࡙ิࡴ࡙ྊ⬗࡛ࡖࡒ◂✪Ἢࢅ⣺ࡌࡾࠊ ࠈ࠽ᮇ◂✪ࡢࠉ㤫㒌ኬᏕ᮶ாࡡ♊㎰ ಆ᪺࣬⏛ᒱ ୦༡ኃ࡛ࡡභྜྷ◂✪࡚࠵ࡾࠊ 12 ≁ืㅦⁿ I: ࠈ᩺₪ࢣࢿ࣑ࢰࣅࣤࢡࢬࣤࢰ࣭ࡡὩິ 㔕 Ⰳ ᩺₪ኬᏕ⬳◂✪ᡜ㜻ᒌ⏍⛁Ꮥࣛࢮ࣭ࢪ◂✪ࢬࣤࢰ࣭ ࣁ࢛ࣛࢮ࣭ࢪ◂✪㒂㛓ࠈ 㐿ఎᏄᶭ⬗よᯊᏕฦ㔕 㛏࠷ெ㢦ࡡṌྍࡡ୯࡚ࠉ༎ฦ㣏ᩩࡡ☔ಕࠉវࡡග᭱ࠉ༈⒢ᢇ⾙ࡡ㐅Ṅ࣬࣬࣬ࠈ ᠻࠍ ࡢ࠾ࡖ࡙࠷㧏㱃♣ఌࢅ㎼࠻࡙࠷ࡾࠊୌ᪁ࠉ㛏ᑋ࡛ᘤᥦ࠻࡞ࠉࡆࡿࡱ࡚ெ㢦⤊㥺ࡊࡒࡆ ࡛ࡡ࠷Ẵ࡛ྡྷࡀྙ࠹ࡆ࡛࡞ࡖࡒࠊࡐࡡ 1 ࡗ㧏㱃⩽ࡡヾ▩࡚࠵ࡾࠊᠻᅗࡡヾ▩ ࡢ 170ࠤ200 ெࠉୠ⏲࡚ࡢ 2400 ெࠉ2020 ᖳ࡞ࡢ 4000 ெࠉ2040 ᖳ࡞ࡢ 8000 ெ ⨧ᝀࡊࠉ460 ெ/ᖳ㸝1 ெ/7 ⛂㸞ࡡ᩺ぞⓆ᥆ᏽࡈࡿࡾࠊヾ▩ࡡ 2/3 ࡢࣜࢵࣀ ࣏࣭㸝AD㸞࡚࠵ࡾࠊ1906 ᖳ 11 ᭮࡞ࢺࢵࡡ⢥♼⛁༈ࣜࢵࣀ࣏࣭᭩ิࡡᝀ⩽ࢅチ ᐳࡊ࡙௧ᮮࠉ100 ᖳ㛣࡚ AD ࡢ᛬ቌࡊࡒࠊ⮣ᗃⓏ࡞ࡢ㍇࠷∸ᚸࡿ࠾ࡼ㔔ᗐヾ▩㝸ᐐࠉᐱࡒ ࡀࡽ࡚㣏ࡾࡆ࡛ࡵ࡚ࡀ࠷≟ឺ࡞⥾ᚆ࡞㐅⾔ࡌࡾࠊ⣵⬂⏍∸ᏕⓏ࡞ࡢྊ㏣Ⓩ♼⤊⣵⬂ ᶭ⬗ୖ࠾ࡼྊ㏣Ⓩᙟឺን࡚࠵ࡾ⩹ெᩤࡡฝ⌟ࠉ♼⤊ཋ⦼⥌ንࠉ♼⤊⣵⬂⬲ⴘ ࡛ 10 ᖳ௧୕࠾ࡄ࡙㐅⾔ࡌࡾࠊࡆࡡࡻ࠹࡞㧏㱃⩽⑄ᝀࡢమṒ⣵⬂Ṓ࡞㎾ࡘ࠷ࡒ࡛ࡵゕ ࠻ࡾࠊ ࠈⓆᖳ㱃ࡡࡻࡽⱕ࠷ࣜࢵࣀ࣏࣭ᆵヾ▩࡛⩹ெᛮヾ▩ࡢ㛏࠷㛣༇ืࡈࡿ࡙࠷ࡒࠉ 1970 ᖳ࡞⌦ᏕⓏᡜぜ࠾ࡼ୦⩽ࡢྜྷࡋ⑄ᝀ࡚࠵ࡾࡆ࡛よࡖࡒࠊኣࡂࡡ♼⤊⑄ᝀ࡞ࡢኣ Ⓠᐓ⣌▩ࡼࡿ࡙࠽ࡽࠉAD ࡵౚᩐࡢ㟸ᖏ࡞ᑛ࠷ᖏⰅమඁᛮ㐿ఎᙟᘟࢅ♟ࡌ༟ୌ 㐿ఎᏋᅹࡊࠉࡐࡡཋᅄ㐿ఎᏄ㸝APP,ࠈ PSEN1,ࠈ PSEN2㸞ྜྷᏽࡈࡿࠉ95㸚௧୕ࢅ༥ࡴ ࡾᬄⓆᆵᏓⓆᛮ AD ࡞ࡗ࠷࡙ࡵฦᏄ㐿ఎᏕࠉ⣵⬂⏍∸Ꮥࡡ◂✪᛬㏷࡞㐅ࢆࡓࠊAD ࡵࢣࢿ࣑ሒࢅᇱㄢ࡛ࡊ࡙⎌ሾᅄᏄ々㞟࡞⤙ࡲྙࡖࡒ⏍మཬᚺࡡ◒⥚࡛ᤂ࠻ࡾࡆ࡛ฝ ᮮࡾࠊຊ㱃࡞ఔࡖ࡙ AD ࡡ᭯⋙࠽ࡻࡦ⨧ᝀ⋙ࡢභ࡞㧏ࡂࡾࠉ㧏㱃⩽ධဤ AD ࡞ࡢ ࡼ࠷ࠊⓆࡌࡾ࠾ࡊ࠷࠾ࡡ㜀ೋࢅ୕ୖࡈࡎ࡙࠷ࡾࡡ㐿ఎⓏࠔ⨧ࡽࡷࡌࡈࠕ࡛⩻࠻ ࡼࡿࡾࠊ ࠈࡆࡡࡻ࠹⫴ᬊ࡞࠵ࡖ࡙ࠉ ࠔAD ࡡ㐿ఎⓏ༱㝜ᅄᏄࡡ᥀⣬◂✪ࠕࠔ㧏㱃⩽ 5 ኬ⑄ᝀࡡග ᭱㸝2000 ᖳ-㸞ࠕࣈࣞࢩ࢘ࢠࢹ࡞ཱིࡽ୕ࡅࡼࡿࡒࠊࡆࡡ࣐ࣝࢼ࣑ࣈࣞࢩ࢘ࢠࢹ࡚࢛࣭ࣜࢩ ࣔࣂࣤమโࡡ JGSCAD㸝The Japanese Genetic Study Consortium for Alzheimer’s Disease; 45 ᪃ ス㸞ࢅ⤄⧂ࡊࡒࠊJGSCAD ୯ᚨ࡛ࡖ࡙ࠉභ㏳チ᩷ᇱ‵ࢅషᠺࡊ࡙Ⓠᖳ㱃ࠉᛮืࠉ⮣ ᗃᚨ⌦᳠ᰕࠉ⾉ᾦ⏍Ꮥࢸ࣭ࢰ➴ࡡチ⒢ሒ㝮ࡊࡒࠔ㈻ࡡ㧏࠷ࠕኬぞᶅࢣࢿ࣑㞗ࢅ ⾔࠷ࠉ⌟ᅹ 7000 ౚࢅ㉲࠻ࡒࠊ㸹㹃㸶ࡢࡌ࡙ Niigata Genotyping Center ࡞㞗ࡴࠉୌᣋࡊ࡙ ࢣࢿ࣑よᯊࢅ⾔࠹୯ᰶ᪃ス࡛ࡊ࡙Ὡິࡊ࡙ࡀࡒࠊAD ࡢ⥾ᚆ࡚࠵ࡾ☔ᐁ࡞㐅⾔ࡌࡾ⑄ᝀ ࡚࠵ࡾࡡ࡚ࠉ⌟ᅹḿᖏ࡚࠵ࡖ࡙ࡵ 5 ᖳᚃ࡞Ⓠࡌࡾ࠾ࡵ▩ࡿ࠷ࠊJGSCAD ࡚ࡢᶋ᩷Ⓩ࡞ モᩩࢅ㞗ࡊࡒࡡ࡚ࠉḿᖏ—㸳㍇ᗐヾ▩㝸ᐐ—㸳AD ࡡ⛛⾔ࢅⓏ☔࡞チ᩷ࡌࡾ๑ྡྷࡀ◂ ✪࡚㞗ࡌࡾモᩩྊḖ࡚࠵ࡾࠊJGSCAD ẍ⫶࡛ࡖ࡙ධᅗ 35 ᪃スཤຊࡌࡾኬぞ ᶅ๑ྡྷࡀ⮣ᗃ◂✪ࠉ2007 ᖳ࠾ࡼ㛜ጙࡈࡿࡒࠊ⮣ᗃチ᩷ࠉᚨ⌦᳠ᰕࠉ⬳⏤ാࠉࣁ࢛࣏࣭ ࣭࢜ῼᏽࠉࢣࢿ࣑よᯊࢅ 600 ெ࡞ࡗ࠷࡙༖ᖳࡇ࡛࡞㏛㊟ࡌࡾࠊධ⿍㥺⩽ࡡࣁ࢛࣏࣭࣭࢜ 13 ῼᏽ࠽ࡻࡦࢣࢿ࣑よᯊ୩ࡦ࡞ DNAࠉ⾉ₚࠉ⾉ΰࠉ⬳⬠㧂ᾦࠉᑺࠉṒࣛࣤࣂ⌣ࣁ ࢛ࣛࢮ࣭ࢪಕᏋࡡࢤ࡛ࡊ࡙௴ຸ࡞ᙔࡒࡖ࡙࠷ࡾࠊ 14 ≁ืㅦⁿ II: ࠈ♼⤊⣵⬂ࡡኣᵕᛮ⋋ᚋࡡࡒࡴࡡฦᏄᡋ␆ ᫅㔕ࠈᖷ㞕 ᅗ❟⢥♼࣬♼⤊ࢬࣤࢰ࣭ ♼⤊◂✪ᡜࠈ チ᩷◂✪㒂 ᠻࠍࣃࢹࢅྱࡳ㢦ࡡ୯ᯙ♼⤊⣌࡞ࡢᩐⓊࠤᩐ༐⛸㢦ࡵࡡ♼⤊⣵⬂Ꮛᅹࡌࡾࠉࡆ ࡿࡼኣ⛸ኣᵕ♼⤊⣵⬂ࡐࡿࡑࡿᅖ᭯ࡡᶭ⬗ࢅⓆᥱࡌࡾࡆ࡛࡞ࡻࡖ࡙ࠉ々㞟࠾ࡗ㧏ᗐ ⬳ᶭ⬗ྊ⬗࡛ࡾࠊ࠾ࡻ࠹࡞ࠉࠔ࠷࠾࡞ࡊ࡙ኣ⛸ኣᵕ♼⤊⣵⬂⏍ࡲฦࡄࡼࡿࡾࡡ࠾ࠕ ࡢ♼⤊⛁Ꮥ࡞࠽ࡄࡾ㔔さၡ㢗࡚࠵ࡾࠊⓆ⏍㐛⛤࡞࠽࠷࡙ࡢࠉኬ༖ࡡ♼⤊⣵⬂ࡢ♼⤊⟮ࡡ ♼⤊୕⓮࠾ࡼ⏍ࡲฝࡈࡿࡾࠊᚉᮮࡡよ๕ᏕⓏ◂✪ࡷ birth dating study ࡞ࡻࡖ࡙ࠉ♼ ⤊⣵⬂ࡡ⛸㢦ࡢࠉࡐࡡ⣵⬂⏍ࡲฝࡈࡿࡾ♼⤊୕⓮ࡡన⨠࠽ࡻࡦ࡞┞㛭࠵ࡾ࡛⩻࠻ ࡼࡿ࡙࠷ࡒࠉࡐࡡฦᏄⓏᐁమ࡞ࡗ࠷࡙ࡢᮅࡓ᪺Ⅴኣ࠷ࠊ ࠈ㎾ᖳ࡞ࡖ࡙ࠉ࣏ࢪࢅࡢࡋࡴ࡛ࡌࡾ࣓ࢸࣜິ∸࡚ࡡ㐿ఎᏕⓏよᯊᡥἪ┘てࡱࡊࡂⓆ ᒈࡊ࡙ࡀࡒࠊࡆࡿ࡞ࡻࡖ࡙ࠉ≁ᏽࡡ♼⤊⣵⬂♼⤊୕⓮ࡡࡡ㡷ᇡ࠾ࡼ࠷ࡗ⏍ࡲฝࡈࡿࡾ ࡡ࠾ࠉࡐࡊ࡙ࡐࡆ࡞ࡢࡡࡻ࠹㐿ఎᏄ࣬ฦᏄ㛭ࡊ࡙࠷ࡾࡡ࠾ࠉ᪺ࡼ࠾࡞ࡈࡿ ࡗࡗ࠵ࡾࠊᠻࠍࡢࠉᑚ⬳⓮㈻ࡡධ࡙ࡡ㡷ᇡࢅḖࡊࠉ㐘ິㄢ≟ࢅ♟ࡌࠉ᩺ࡒ✲↓ን ␏࣏ࢪ cerebelless ࢅⓆぜࡊࠉࡐࡡཋᅄ㐿ఎᏄࢅྜྷᏽ࣬よᯊࡌࡾࡆ࡛࡞ࡻࡖ࡙ࠉ୕オၡ 㢗࡞㏍ࢀ࠹࡛ࡊ࡙ࡀࡒࠊࡐࡊ࡙ࠉᑚ⬳ࡡ⛸♼⤊⣵⬂࠽ࡻࡦᑚ⬳ᢖᑏࡌࡾ⛸㢦ࡡ♼⤊ ⣵⬂࠷࠾࡞ࡊ࡙ࡐࡿࡑࡿࡡᛮࢅ⋋ᚋࡌࡾࡡ࠾ࠉᑛࡊࡍࡗ࡚ࡢ࠵ࡾమ⣌Ⓩ࡞᪺ࡼ࠾࡞ ࡽࡗࡗ࠵ࡾࠊᮇㅦⁿ࡚ࡢࠉ࣏ࢪࡡ㐿ఎᏕࢅ⏕࠷ࡒᠻࠍ࠽ࡻࡦࡡࢡ࣭ࣜࣈࡡ◂✪ࢅ⣺ ࡊࡼࠉࠔ♼⤊⣵⬂ࡐࡡኣᵕᛮࢅ⋋ᚋࡌࡾࡒࡴࡡฦᏄᡋ␆ࠕ࡞ࡗ࠷࡙ࠉ⩻ᐳࡊࡒ࠷ࠊ 15