Title ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後予測マーカーである Author(s

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ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後予測マーカーである
渡部, 幸央
歯科学報, 116(3): 202-206
http://doi.org/10.15041/tdcgakuho.116.202
Right
Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College,
Available from http://ir.tdc.ac.jp/
２０２
解説（学位論文
解説）
ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後予測マーカーである
Copy number increase of ACTN4 is a prognostic indicator in salivary gland
carcinoma
東京歯科大学口腔顎顔面外科学講座
略歴 ２００８年東京歯科大学卒業，東京都立多摩総合医療センター臨床研修医，
２０１４年東京歯科大学大学院歯学研究科
（口腔外科学専攻）
修了，同年学位取得
（博
士
（歯学）
東京歯科大学）
，東京歯科大学千葉病院口腔外科レジデント。研究テー
マ：早期舌癌における後発頸部リンパ節転移予測マーカーの開発
渡部 幸央
Yukio Watabe
キーワード：ACTN4，唾液腺癌，予後マーカー
Key words：ACTN4, salivary gland carcinoma, prognostic marker
）
（２０１６年２月５日受付，２０１６年３月８日受理， 歯科学報 １１６：２０２−２０６，２０１６．
http : //doi.org/１０.１５０４１/tdcgakuho.１１６.２０２
本研究では細胞運動や突起形成に必須なアクチン
はじめに
束状化タンパク質であるアクチニン−４（遺伝子
唾液腺癌は全ての悪性腫瘍の０．
５％未満，頭頸部
名：ACTN4）
に焦点をあて，唾液腺癌における予後
癌の約５％を占めるとされる稀な腫瘍であり，希少
予測バイオマーカーとしてのアクチニン−４の有
１）
がんに位置付けられる 。さらにその組織型は非常
用性を fluorescence in situ hybridization 法（FISH
に多彩であり世界保健機構（WHO）
では２４種類に分
法）
および免疫組織化学染色法を用いて検討した。
類されている。唾液腺癌の予後因子としてこれまで
アクチニン−４は１９９８年に本田らによってクローニ
に臨床病期，年齢，発生部位，組織学的悪性度など
ングされ，癌細胞の浸潤・転移に関与すると報告さ
が報告されている。特に組織学的悪性度はリンパ節
れている４）。さらにアクチニン−４の過剰発現は乳
転移のリスクを判定することができ，治療戦略の
癌４），大腸癌５，６），卵巣癌７，８），膀胱癌９，１０），口腔癌１１），
決定に有用とされている２）。しかし“希少”さらに
膵癌１２，１３），肺癌１４−１６）の悪性度と関与しており，近年
“多彩”といった唾液腺がんの特徴から有効な診断
では ACTN4 の遺伝子増幅は卵巣癌７，８），膵癌１２，１３），
法や治療戦略の決定には難渋することが多い。
肺癌１５）でタンパク質発現より厳密に予後を予測する
近年，がん診療の個別化医療においてバイオマー
カーが重要な役割を果たしている。バイオマーカー
ことができると報告され，がん診療におけるバイオ
マーカーとしての有用性が示唆されている１７）。
とは「通常の生物学的過程，病理学的過程，もしく
本研究は ACTN4 コピー数の増加が唾液腺癌の予
は治療的介入に対する薬理学的応答の指標として，
後予測バイオマーカーとして有用であることを初め
客観的に測定され評価される特性」と定義されてい
て報告したものである。
３）
る 。唾液腺癌において組織学的悪性度や予後と相
研究方法と結果
関するバイオマーカーを同定することができれば，
症例に応じた最適な治療戦略を提供することが可能
となると考えられる。
対象は１９９７年から２０１１年に独立行政法人国立がん
研究センター中央病院頭頸部腫瘍科を受診し，根治
― ３６ ―
歯科学報
Vol．１１６，No．３（２０１６）
２０３
的治療を目的に切除術を行った唾液腺がん患者５８名
子コピー数の解析をおこなった１５）。蛍光顕微鏡で各
とし，対象患者の唾液腺癌組織が搭載された組織マ
症例において２０個の唾液腺癌細胞の ACTN4（レッ
イクロアレイを作成した（図１，２）
。唾液腺癌組織
ド蛍光シグナル）
，CEP１９
（グリーン蛍光シグナル）
マイクロアレイの作成には病理診断時に用いたホル
を計測した。FISH 法により５８例中１４例（２４．
１％）
に
１８）
マリン固定パラフィン包埋ブロックを用いた 。作
ACTN4 コピー数増加を認めた。
成した唾液腺癌組織マイクロアレイは４μm に薄切
免疫組織化学染色によるアクチニン−４のタンパ
した後に，FISH 法，免疫組織化学染色に用いた。
ク質発現解析にはアクチニン４モノクロナール抗体
本研究は国立がん研究センター倫理委員会で承認さ
（トランスジェニック社）
を用いた１４）。免疫組織化学
れたものである（＃２０１０−０７５９）
。
染色は自動免疫組織化学染色機（ベンタナ ディスカ
FISH 法による ACTN4 コピー数解析には ACTN4
バリー ULTRA，ロシュ・ダイアグノスティック
FISH プローブ（ACTN4 DNA Probe, Abnova）
を用
ス）
を用いて行った１４，１５）。免疫組織化学染色により５８
いて唾液腺癌組織マイクロアレイ上で ACTN4 遺伝
例中３９例（６７．
２％）
がアクチニン４タンパク質発現陽
性であった。
１．ACTN4 コピー数は組織学的悪性度，脈管浸潤
と関連がある
フィッシャーの正確確率検定を用いて ACTN4 コ
ピー数と臨床病理学的因子との関連を解析した。
ACTN4 コピー数増加群は非増加群と比べ組織学的
高悪性度群（P＜０．
０５）
と脈管浸潤陽性群（P＜０．
０５）
で統計学的に有意に多いことが明らかになった。一
方，ACTN4 コピー数と年齢，性別，腫瘍径，リン
パ節転移の有無，神経浸潤の有無との間に有意差は
認められなかった（表１）
。
図１
組織マイクロアレイの作成
多数の患者検体（パラフィンブロック）
から組織を円柱
状に採取し，新しく用意したパラフィンブロックへ埋入
させる。そして新たなパラフィンブロックを作成する
図２
アクチニン４タンパク質発現と臨床病理学的因子
との関連も同様に解析したが，いずれも統計学的に
有意な差は認められなかった（表２）
。
唾液腺癌組織マイクロアレイ（H-E 染色）
対象患者５８例の組織が１枚のスライドグラスに貼付されている。右図は１つのコアを拡大した図である
― ３７ ―
２０４
渡部：ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後予測マーカーである
表１
ACTN4 コピー数と臨床病理学的因子の関連性
ACTN4 FISH
正常コピー数群
年
齢
性
別
腫瘍径
リンパ節転移
組織学的悪性度
神経浸潤
脈管浸潤
表２
６７歳未満
６７歳以上
男性
女性
T１−T２
T３−T４
不明
なし
あり
低・中悪性度
高悪性度
なし
あり
なし
あり
２６
（８３．
９）
１８
（６６．
７）
２４
（７５．
０）
２０
（７６．
９）
１２
（１００）
２８
（６８．
３）
４
（８０．
０）
３１
（７９．
５）
１３
（６８．
４）
２６
（８６．
７）
１８
（６４．
３）
２３
（７６．
７）
２１
（７５．
０）
３６
（８３．
７）
８
（５３．
３）
５
（１６．
１）
９
（３３．
３）
８
（２５．
０）
６
（２３．
１）
０
（０）
１３
（３１．
７）
１
（２０．
０）
８
（２０．
５）
６
（３１．
６）
４
（１３．
３）
１０
（３５．
７）
７
（２３．
３）
７
（２５．
０）
７
（１６．
３）
７
（４６．
７）
陰
年齢
性別
腫瘍径
リンパ節転移
組織学的悪性度
脈管浸潤
０．
１２６７
０．
８６４８
０．
０５０３
０．
５１４１
０．
０４６５
０．
８８２２
０．
０３２６
アクチニン−４タンパク質発現と臨床病理学的因子の関連性
アクチニン−４ IHC
神経浸潤
P値
コピー数増加群
６７歳未満
６７歳以上
男性
女性
T１−T２
T３−T４
不明
なし
あり
低・中悪性度
高悪性度
なし
あり
なし
あり
性
９
（２９．
０）
１０
（３７．
０）
１３
（４０．
６）
６
（２３．
１）
４
（３３．
３）
１４
（３４．
１）
１
（２０．
０）
１０
（２５．
６）
９
（４７．
４）
７
（２３．
３）
１２
（４２．
９）
１１
（３６．
７）
８
（２８．
６）
１３
（２９．
５）
６
（４２．
９）
陽
性
２２
（７１．
０）
１７
（６３．
０）
１９
（５９．
４）
２０
（７６．
９）
８
（６６．
７）
２７
（６５．
９）
４
（８０．
０）
２９
（７４．
４）
１０
（５２．
６）
２３
（７６．
７）
１６
（５７．
１）
１９
（６３．
３）
２０
（７１．
４）
３１
（７０．
５）
８
（５７．
１）
P値
０．
５１７０
０．
１５６７
１
０．
０９８０
０．
１１３４
０．
５１１６
０．
５１４１
信頼区間３．
５６−３３．
１４，P＜０．
０１）
そ し て ACTN4 コ
２．ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後を予測する
カプランマイヤー法 お よ び ロ グ ラ ン ク 検 定 で
ピー数増加（ハザード比５．
２１，９５％信頼区間１．
９２−
ACTN4 コピー数増加群と非増加群の全生存率を検
１４．
１９，P＜０．
０１）
が危険因子として選択された。そ
証した。コピー数増加群が非増加群と比べ統計学的
の３つの因子を用いた多変量解析では脈管浸潤陽性
に有意に全生存率が低いことが明らかとなった（P
（ハザード比７．
４６，９５％信頼区間１．
９８−２８．
０６，P＜
＜０．
０１）
（図３）
。全生存率におけるコックス比例ハ
０．
０１）
と ACTN4 コ ピ ー 数 増 加（ハ ザ ー ド 比３．
２３，
ザードモデルによる単変量解析では組織学的高悪
９５％信頼区間１．
０８−９．
６８，P＜０．
０１）
が全生存率に影
性度（ハザード比４．
６９，９５％信頼区間１．
５０−１４．
６１，
響を与える独立した予後予測因子であった（表３）
。
P＜０．
０１）
，脈管浸潤陽性（ハザード比１０．
８６，９５％
― ３８ ―
歯科学報
Vol．１１６，No．３（２０１６）
２０５
増加は組織学的悪性度と相関する予後予測バイオ
まとめ
マーカーと成り得ることが示唆された。ACTN4 コ
唾液腺癌は希少であり，また組織型が多彩である
ピー数解析は唾液腺癌の治療方針の決定の一助とな
ことから予後を評価することは困難と言われてい
ることが考えられる。本研究で用いた FISH 法によ
る。本研究から唾液腺癌において ACTN4 コピー数
る遺伝子コピー数解析は胃癌，乳癌における HER
２解析などで既に実臨床に応用されている手法であ
り，ACTN4 コピー数解析も実臨床で応用は可能で
ある。しかし，本研究は単施設でおこなわれた後ろ
向き研究であり，今後は前向き多施設共同研究を計
画し症例数を増やして解析する必要がある。さら
に，将来 ACTN4 を標的とした阻害剤開発により高
悪性度唾液腺癌に対する新規治療法を提示できる可
能性もある。
謝 辞
図３
全生存率の比較
カプランマイヤー法およびログランク検定を用いて全
生存率を比較した。正常コピー数群と比較しコピー数増
加群で有意に全生存率が低かった（P＜０．
０１）
表３
本研究全般にわたる多大なご支援，ご指導を賜りました独
立行政法人国立がん研究センター研究所治療開発グループ創
薬臨床研究分野の山田哲司主任分野長，本田一文ユニット
長，同中央病院病理科の森 泰昌先生，頭頸部腫瘍科の吉本
世一先生に心から御礼を申し上げます。また，国立がん研究
センター研究所との共同研究へ導いて下さいました東京歯科
大学口腔顎顔面外科学講座柴原孝彦教授，オーラルメディシ
ン・口腔外科学講座野村武史教授に深く感謝申し上げます。
全生存率におけるコックス比例ハザードモデルによる単変量および多変量解析
単変量解析
ハザード比 ９５％信頼区間
年
性
齢
別
T 因子
リンパ節転移
組織学的悪性度
神経浸潤
脈管浸潤
アクチニン−４タンパク質発現
ACTN４コピー数
６７歳未満
６７歳以上
女性
男性
T１−T２
T３−T４
なし
あり
低・中悪性度
高悪性度
なし
あり
なし
あり
陰性
陽性
正常
増加
２．
６９
１．
２０
２．
２８
２．
５１
４．
６９
１．
３８
１０．
８６
１．
６４
５．
２１
１
０．
９３−７．
７８
１
０．
４５−３．
２４
１
０．
５１−１０．
１１
１
０．
９３−６．
７５
１
１．
５０−１４．
６１
１
０．
５１−３．
７１
１
３．
５６−３３．
１４
１
０．
５３−５．
１０
１
１．
９２−１４．
１９
― ３９ ―
多変量解析
P値
ハザード比 ９５％信頼区間
P値
０．
０６７
０．
７１４
０．
２７９
０．
０６９
＜０．
０１
１．
３２
１
０．
３１−５．
４５
０．
７０１
７．
４６
１
１．
９８−２８．
０６
＜０．
０１
３．
２３
１
１．
０８−９．
６８
＜０．
０１
０．
５２４
＜０．
０１
０．
３９４
＜０．
０１
２０６
渡部：ACTN4 コピー数は唾液腺癌の予後予測マーカーである
文
献
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本論文は，下記学位論文の内容を解説した。
Copy number increase of ACTN4 is a prognostic indicator in salivary gland carcinoma. Watabe Y, Mori T,
Yoshimoto S, Nomura T, Shibahara T, Yamada T, Honda
K. Cancer Medicine, 3 ; 613­622 : 2014.
連絡先：〒１８３‐８５２４ 東京都府中市武蔵台２−８−２９
東京都立多摩総合医療センター歯科口腔外科 渡部幸央
― ４０ ―