Twinkle:Tokyo Women`s Medical University

Title
Author(s)
Journal
URL
アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症のス
クリーニングと解析
小島, 司
東京女子医科大学雑誌, 59(7):870-878, 1989
http://hdl.handle.net/10470/7069
Twinkle:Tokyo Women's Medical University - Information & Knowledge Database.
http://ir.twmu.ac.jp/dspace/
62
〔書女歴喜78第鷺元劉言〕
原
著
アデニソホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症の
スクリーニングと解析
東京女子医科大学 第3内科学教室（主任：平田幸正教授）
東京女子医科大学 リウマチ・痛風センター（指導：西岡久寿樹教授）
コ
ジマ
小
ツカサ
島
司
（受付 平成元年3月20日）
Screening of and Biochemical Studies on Adenine Phosphoribosyltransferase Deficiency
Tsukasa KOJIMA
Department of Medicine III（Director：Prof． Yukimasa HIRATA），
Institute of Rheumatology（Director：Prof． Kusuki NISHIOKA），
Tokyo Women’s Medical College
Simple and accurate assay procedures for adenine phosphoribosyltransferase（APRT）activity and
2，8・dihydroxyadenine（DHA）concentration were developed for screening of APRT deficiency and
biochemical studies on the disease． APRT activity was assayed by a nonradiochemical method in
which AMP and AMP metabolites produced from a substrate adenine were converted to inosine by the
enzymes alkaline phosphatase and adenosine deaminase． The inosine thus produced was determined
by high−performance liquid−chromatography（HPLC）． The concentration of DHA was determined by
the HPLGelectrochemical detection method after removing uric acid from the sample by uricase
treatment，．
One men from 91 healthy adults was found to have a partial deficenecy of erythrocyte APRT who
exhibited only 19．0％of the normal enzyme activity． Two cases with complete APRT deficiency were
found in a family from the 621 patients with urolithiasis．
The purine metabolism in DHA lithiasis was studied． There were no differences in the purine
excretion pattern between completetype and Japanese−type APRT deficiencies． The excretion
mechanism of DHA was not similar． to that of uric acid but similar to that of xanthine in human
，
kidney．
Apart of APRT−deficient subjects have been asymptomatic． This group has a high risk of renal
damage， and the disorder is treatable with allopurino1． Early and accurate diagnosis is therefore
important for this disorder． I believe that the present assay procedures for APRT activity and DHA
concentration， may be quite useful in screening and studies on APRT deficiency．
＊本論文では次の略号を使用した．
ARPT：adenine phosphoribosyltransferase （EC 2．4．2．7）， HGPRT：hypoxanthine−guanine phosphor−
ibosyltransferase（EC 2，4．2．8），ALP：alkaline phosphatase（EC 3ユ．3．1），ADA：adenosine deaminase（EC
3。5．4．4），Ade：adenine， Hyp：hypoxanthine， Gua：guanine， PRPP：phosphoribosylpyrophosphate， DHA：
2，8−dihydroxyadenine， AMP：adenosine−5’・monophosphate， ADP：adenosine−5’一diphosphate， ATP：
adenosine−5’一triphosphate， IMP：inosine−5ノーmonophosphate， GMP：guanosine−5ノーmonophosphate， Ino：
inosine
Ado：adenosine．
，
一870一
63
緒
2．試薬
言
プリンヌクレオチド，ヌクレオシド，塩基，
APRT＊はHGPRTと同様にプリンサルベージ
経路に位置し，AdeとPRPPからAMPを合成す
DHA， PRPPおよび活性炭はシグマ社， ALPと
る反応を触媒する酵素である．本酵素が欠損する
ADAはべーリンガーマンハイム・山之内（株），
とAde過剰となり，キサンチンオキシダーゼ（EC
ウリカーゼ（EC 1．73．3）はオリエンタル酵母社製
1．1。3．22）によって酸化され8一ヒドロキシアデニン
を用いた．他の試薬は全て市販の試薬特級を用い
を経てDHAを生ずる． DHAは非常に水に溶け
た．
難い化合物のため，尿路結石症ひいては腎不全症
3．APRTとHGPRT活性の測定
の原因となる1）．ヒトAPRTの遺伝子は常染色体
ヘパリン静脈採血した血液を4℃，1，000gで5
No，16にあり2），欠損症の遺伝型式は常染色体劣
分遠心，血漿とバッフィーコートを吸引除去後
性，その出現頻度は50，000∼100，000に1例と推定
0．154mol／1NaClで3回洗浄，同溶液でHb濃度
されている3）．本症の診断，臨床解析そして投薬治
を約100g／1となるように調製して一80℃に保存
療のモニターに，血中と尿中のDHAの定量は不
可欠である．しかしDHAの定量法については，結
した．凍結保存して置いた洗浄赤血球は，測定の
時に37℃恒温槽で短時間に解凍，0．1mlを試験管
石を材料とした赤外分光分析による定性法がある
に採取，0．05％Triton X−100水溶液0．9mlを加え
のみで，特に血中での測定報告は皆無である．ま
て混和した．試料に含まれる既存のプリン体を除
たAPRT活性の測定法もラジオアイソトープを
去するために，活性炭約10mg（ミクロスパーテル
使用した方法があるものの，これもまた一般的に
で約一杯）を加えて混和した後，4℃に30分放置
は受け入れられていない．
した．3，000g，10分間遠心して得られたプリン体
このように簡便で正確な診断法がないという理
除去溶血液のHb濃度をシアンメトヘモグロビン
由から，APRT欠損症は希な疾患のひとつと考え
法（ヘモキット・N：日本商事）により測定し，酵
られていた．ところが最近，Kamatani4）はAPRT
素活性測定用の試料とした．
APRT活性の測定原理は， AdeとPRPPから
欠損症はこれまで考えられていたほど希ではな
く，末診断のまま放置されている症例が多数存在
する可能性を示唆した．
生じたAMPを測定するものである．しかし，生
じたAMPは溶血液に共存する他の酵素により代
そこで，臨床検査で一般的に応用可能なAPRT
謝される．そこでAPRTの反応後ADAとALP
活性およびDHA濃度の測定法を考案し， APRT
欠損症のスクリーニングと解析への応用を行っ
を同時に作用させ，AMPとその代謝物を全てIno
た．
溶血液50μ1に反応液（50mmol／1トリスーHCI緩
に変換して活性を求める方法について検討した．
衝液，pH 7．4，5mmol／1MgC12，31nmo1／1PRPP，
材料と方法
1．対象
0．41nmol／1Ade）0．5mlを加え37℃，60分反応し
赤血球APRTとHGPRT活性は，健常成人91
た後，100℃，5分加熱反応停止，除蛋白を行った．
例（男性46例，女性45例），および各種プリン代謝
3，000g，10分の遠心上清0．3mlにALP， ADA反
異常症について測定した．DHAの定量は，健常成
応液（100mmol〃トリスーHCI緩衝液， pH 9．0，
人26例（男性13例，女性13例）の血清と尿，人工
10mmol／1 MgC12，1．OU／ml ALP，1．5U／ml
透析患者185例の血清，および尿路結石患者621例
ADA）0．5mlを加え37℃，60分反応した．3．6mol／
の尿を対象とした．APRT欠損症5家系6例とそ
∼過塩素酸50μ1で反応停止，除蛋白を行い，3，000
の家族4例，および赤血球APRT活性の測定で
g，10分の遠心上清中のInoをHPLCで分析し
スクリーニングされた1例の低活性例の一血清
た．
DHA濃度とプリン代謝物排泄量の測定を行っ
た．
HGPRT活性の測定原理は， HypまたはGua
とPRPPから生じたIMPまたはGMPを
一871一
64
HPLCで測定するものである．溶血液50μ1
告した方法5）6＞で行った．
（GPRTは20μ1）に反応液（50mmo1〃トリスーHC1
結
緩衝液，pH 7．4，5mmol〃 MgC12，3mmol／1
果
1．AI｝RTとHGPRT活性の測定
APRT活性の測定において， AdeとPRPPか
PRPP，0．4mmol／1HypまたはGua）0．5mlを加
え，37℃で15分反応した．3．6mol／1過塩素酸50μ1
ら生じたAMPの10∼20％はアデニレートキナー
で反応停止，除蛋白を行い，3，000g，10分の遠心
ゼ（EC 1．2．43）によってADPに，そして1∼3％
上清中のIMPまたはGMPをHPLCで分析し
はAMP一デアミナーゼ（EC 3．5．4．6）によってIMP
た．
へと代謝された．この共存酵素の影響を避けるた
活性値はAPRT， HGPRTともに，生成物濃度
めに，APRT反応に続いてALPとADAを同時
の増加から計算してμmol／min／gHbすなわち
に作用させる第二反応を行った．AMP， ADP，
IU／gHbで示した．
ATP， IMP， Adoの第二反応でのInoへの回収率
全自動HPLCシステム（東ソー）の条件は遥
は93，7∼102．7％（平均99．6％）となり，APRT反
遥5）に準じた．すなわち803D型クロマトグラフ，
AS・48オートサンプラー（50μ1のサンプルループ
を使用），UV Model 811UV検出器（254nmにセッ
ト），CP−8000システムコントローラーで構成し
た．カラムは資生堂めCapcell Pak C18（4．6mm
応で生じたAMPは，第二反応によってほぼ完全
にInoに変換された． Fig．1aはAPRT活性測定
のクロマトグラムを示したもので，15分に1件の
連続測定が可能であった．
緩衝液（pH 2．2，メタノール20ml〃含有）を使用
HGPRT活性の測定は，溶血液を材料とした場
合にはAPRTに比べて問題は少なく，反応で生
じたIMPまたはGMPはFig，1b， cに示したよ
し，5μmフィルターおよびエルマのデガッサーを
うに10分に1件の連続測定が可能であった．
通して803Dに接続し，流速は1．Om1／分，圧力約
健常成人の溶血液を試料として，両酵素の基質
i．d．×25cm）．移動相の条件は，0．04mol／1リン酸
100kg／cm2で分析した．
に対する親和性を求めた．50mmo1／1トリスーHCl
4．DHAおよびその他のプリン代謝物の測定
緩衝液，pH 7．4，5mmol〃 MgC12，3mmo1／1
一80℃に凍結保存して置いた血清と尿は，分析
PRPPの条件の時， Ade， Hyp， Guaに対する見
の時に37℃恒温槽で解凍した．標準液（5μmol／1
かけのミカエリス定数（apparent Km）はそれぞ
DHAと300μmol／1 UAの混合液）と血清はそれ
れ2．4×1『5，6．9×10−6，1．5×10−5mol〃となっ
ぞれ0．5mlを採取，尿は25μ1を採取し水0．475ml
た．Ade， Hyp， Guaをそれぞれ0．4mmol〃とし
を加えた．これに50μ1のウリ劃一ゼ試薬（0．21no1／
1トリス・HCI緩衝液， pH 8．5，ウリカーゼ1U／ml）
a）
を加え，室温で30分反応してUAを除去した．3．6
書…4
mol〃過塩素酸50μ1を加えて反応停止，除蛋白を
§
b）
Ade
c）
Hyp
Gua
喜
行い，3，000g，10分の遠心上清をHPLCで分析し
§
lMP
Ino
臣。．。2
た．
是
HPLCの条件はAPRT， HGPRT活性の測定
とほほとんど同一の装置とカラムを使用し，UV
検出器とEC−8000電気化学検出器（ECD，印加電
0
圧450mV）とを連結した．移動相の条件は0．1mol／
0
5
10
15
0
5
10
0
5
Time a「ter injection（min，
1リン酸緩衝液（pH 6．0，メタノール30ml〃含有）
Fig．1
tures
とし，流速1．Om1／分，圧力約100kg／cm2で分析し
た．
Chromatograms for enzyme reaction Inix一
a）APRT
DHA以外のプリン代謝物の測定は，以前に報
assay．
一872一
assay， b）HPRT assay， c）GPRT
10
65
150
a）
20
c）
d〕
e〕
DHA
（》一・OMale
DHA
●一●Fema【e
感
ミ
β
量
毛
囮T・t・1
11
1510
糞
書
壽
〆1
≦≡
DHA
塞，。
呂
レ
薯
o
、
O
b）
0
O．1
U、，一・o
0，2
0．3
0．4
0．5
0．6
1
判
05 05 05
0．7
Tlme after injection（min）
APRT actlvity（μmol！minlgHb）
05 05
Fig．3 Chromatograms for standard solutions（a），
Fig．2 Frequency distribution of erythrocyte
sera from a healthy adult（b）and a sublect with
APRT activity in 9！healthy adults
DHA lithiasis（c）， or urine from a healthy adult
（d）and a subject with DHA lithiasis（e），
た時のAPRTのPRPPに対するapParent Km
は4．7×10−5，HPRTは1．3×10−4， GPRTは2．4×
ンスの関係は，450mVでDHAとともにUAも完
10司mol／1であった．
全に酸化された．UAはヒトの体液と組織に高濃
酵素反応の定量性について，ARPTは反応時間
0∼15分でのBurst反応7）の後は180分まで直線
度に存在するため，低いレベルのDHAの測定の
大きな妨げとなった．そこでウリカーゼでUAを
となり，HPRT， GPRTは0∼60分で直線となっ
除去した．Fig．3は標準液，健常人の血清と尿，
た．試料のHb濃：度と生成物の濃度の関係は，それ
DHA結石例の血清と尿のクロマトグラムであ
る．結石症例にはDHAの大ぎなピークが示され
ぞれ1∼50gHb〃の範囲で直線性が示された．
同一検体を10回測定して求めた測定の再現性
た．
標準液の希釈列で作製した検量線は50μmol〃
は，APRTについては，平均値0．3151U／gHb， CV
4．8％，HPRT活性の測定については，平均値2．10
まで直線となった．また検出限界は絶対量で0．1
1U／gHb， CV 1．9％であった．
pmolであった．
健常成人91例の赤血球APRT活性の測定を行
血清と尿に標準液を加え回収テストを行った．
い，その分布をFig．2に示した．分布形は若干高
血清の場合は含まれる蛋白の体積による影響8）が
活性側に裾を持ち，女性が男性に比べて高い傾向
あるので，得られた濃度に0．95を乗じて補正した．
を示した．また91例中1例に低活性異常を認めた．
血清での回収率は97．3∼112．1％（n；5，平均
この異常例を除いた90例から求めた正常値（ref−
100．3％）であった．尿での回収率は98．3∼103．4％
erence interval）は次のようになった． APRT，
（n＝5，平均10L6％）であった．
男性：n＝45，0．133∼0．4531U／gHb． APRT，女
性：n＝45，0．139∼0．5751U／gHb． APRT，合計：
血清と尿にDHAを添加して行った測定の再現
性の検討では，同時測定，連日測定ともCVで
n＝90，0．127∼0．5271U／gHb． HPRT：n＝90，
1．6∼4．8％であった．
次に本法を健常成人の血清と尿，それと透析患
1．67∼2．791U／gHb． GPRT：n＝90，3．16∼4．40
1U／gHb．
者の血清と尿路結石患者の尿のDHAのスクリー
2．DHAの定量
ニングに応用した．その結果，尿路結石患者に1
HPLCによるDHAの分離条件については
家系2例のAPRT欠損症が見出された．
3．症例解析
様々な移動相について検討したが，0．1mol／1リン
酸緩衝液（pH 6，0，メタノール30ml／1含有）が最
尿中DHAのスクリーニングで見出された
も分離にすぐれていた．ECDの印加電圧とレスポ
APRT欠損症例（Case 1），その家系調査で見つ
一873一
66
Tab藍e l APRT and HGPRT activities（IU／gHb）in erythrocytes of various
purine rnetabolic disorders
APRT
Diagnosis
Case no
Activity
％of normal
HPRT GPRT
NDa
ND
2．29
3．89
Son of 1
0，072
22．0
2．45
4．08
Daughter of 1
0，077
23．5
2．83
4．81
2
DHA lithiasis
ND
ND
2．16
3．73
1
DHA Iithiasis
3
DHA lithiasis
ND
ND
4
DHA lithiasis
0，028
Mother of 4
5
Lesch−Nyhan syndrome
Gout with HGPRT de負ciency
Brother of 6
0，245
74．9
Brother of 6
0，311
95．1
6
2．24
3．50
8．6
1．80
2．64
0，053
16．2
1．71
2．45
0，740
226．3
0，503
153．8
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
2．45
Mother of 6
0，194
59．3
1．42
7
Hereditary xanthinuria
0，582
178．0
2．21
3．92
8
Healthy men
0，062
19．0
1．86
3．22
126．3
2．22
4．08
0．413b
Gout（n＝10）
±
±
0，256
78．3
±
±
0．42
0．68
0，127
38．8
1．67
3．16
0，527
161．2
2．79
4．40
1
Reference interva1（n＝90）
1
1
aND not detectable． bMean±2SD，
Table 2 Concentration of DHA in the sera and excretion of purines in urine of healty
adults， patients with DHA lithiasis， and their families
Case no
1
2
3
4
5
6
De丘cient type
of APRT
（μmol〃）
UA
Hyp
27．0
333
11．0
1．5
181
12．0
Complete
Complete
Complete
urine
（ratio to
Cre，μmo1／mmQI）
Ade
DHA
Ap
4．6
20．2
58．2
ND
ND
20．4
47．7
17．9
5．4
39．2
54．0
14．0
1．0
ND
ND
ND
ND
Xan
OP
塩，5
340
32．1
8．8
15．4
Father of 3
NDa
377
8．5
4．1
9．3
Mother of 3
ND
429
15．0
7．1
9．0
ND
ND
3．0
281
11．6
8．1
12．7
26．1
2．1
294
15．9
10．6
12．8
44．4
ND
ND
ND
ND
1．6
317
134
203
86．9
！3．9
53．0
161
ND
ND
ND
665
13．5
6．9
17．1
563
8．9
5．6
6．1
387
9．6
6．3
5．0
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
341b
5．8
±
3．6
5．7
±
2．9
6．0
±
3．9
ND
ND
ND
Japanese
Japanese
Japanese
Father of 6
Mother of 6
7
Purines in
Serum DHA
19％of normal
Healthy adults（n＝26）
ND
±
87
Cre：creatinine， UA：uric acid， Hyp；hypoxanthine， Xan：xanthine， Ade：adenine， DHA：2，
8・dihydroxyadenine， Ap：allopurino1，0p：oxypurino1．
aND：not detectable， bMean±SD．
かった弟の例（Case 2），および各種プリン代謝異
APRT， HGPRT活性をTable 1に示した．4例
常症例9∼11）と健常成人91例からスクリーニングさ
のDHA結石症のうち1例， Case 4には正常値の
れたAPRT低活性異常例（Case 8）の赤血球
8．6％に相当する明らかなAPRT活性が示され
一874一
67
た．Case 1の息子と娘，およびCase 4の母とCase
分光分析は万能ではない．他に，尿中Ade排泄の
8は正常値の16．2∼23．5％であった．Lesch−
増加で判断するとの報告3）もあるが，Table 2に
Nyhan syndrome（Case 5）ではHGPRTは検出
されず，APRTが正常値の226．3％と上昇してい
た．HGPRT欠損による痛風例（Case 6とその2
人の兄弟）のHGPRTも検出されなかった．しか
しAPRTは正常値の74．9∼153．8％であった．低
示したようにアロプリノール投与例を除くと尿中
Ade排泄の増加は微妙であり，良い診断法とは言
い難い．本症の診断には体内でのDHA産生の確
認が最も有用と考えられ，ここに報告したHPLC−
ECD法を用いれば，結石症または腎機能障害の発
症の前に本症を診断し，治療を行うことが可能で
UA血症を示す先天性キサンチン尿症（Case 7），
そして10例の高UA」血症をともなった痛風例の
ある．反面，APRT欠損ではないDHA産生例，
APRTとHGPRTには顕著な異常は認められな
かった．
例えばAdeの大量摂取14）などの区別，そして
APRT異常の多様性の解析には限界がある．
5家系6例のAPRT欠損症，およびその父母
とAPRT低値例のプリン代謝物の解析結果を
ほとんど活性を示さない完全欠損型に対し，いく
APRT欠損によるDHA結石症には，赤血球に
Table 2に示した． Case 1は今回スクリーニング
らかの活性を示す日本人型の報告がある15）．従来
された症例で，血清クレアチニン（Cre）が6．Omg／
は前者に対し後者は，APRT完全欠損型のヘテロ
dlと上昇し腎機能障害を呈していた． Case 2は
接合体16｝との区別ができず，DHA産生の原因は
Case1の弟， Case7はTable 1のCase 8にあたる．
不明であった．最近，Kamatanilo）とFujimori17）に
Case 2，3，5はアロプリノール投与中の症例であ
よってさらに解析がなされ，基質のひとつPRPP
る．健常成人とAPRT欠損症の父母の」血清と尿
には，本法をもってしてもDHAを検出すること
に対する親和性の低下によることが解明された．
はできなかった．しかしAPRT欠損症では，血清，
欠損症の多様性を解析するうえで重要と考えられ
尿ともにDHAが検出された．特に血清Creの上
た，
このように赤血球APRT活性の正確な測定は，
赤血球APRT活性の測定は， HGPRT活性の
昇していたCase 1の血清DHAは27．0μ卑ol〃と
著しい上昇を示した．アロプリノール投与例を除
測定に比べて問題が多い．第一に活性が非常に低
いたAPRT欠損例の尿中Adeの排泄は軽度上昇
い（HGPRTの約1／6）．従来の測定法がラジオア
にとどまっていた．
イソトープラベルの基質を使用せざるを得なかっ
Cartier12）によって報告されてから25年を経過し，
た理由はここにある．また反応液中でAPRT活
性によって生じたAMPの一部は他の代謝物に変
換されるため，AMpのみの測定では負誤差を生
世界でおよそ50例が報告されている決して希では
ずることが示された．AMPはAPRT活性の
ないプリン代謝異常症のひとつである．特に日本
1，000倍にも相当する活性を持つ赤血球酵素アデ
考
察
APRT欠損によるDHA結石症は，1974年
人においては，日本人型APRT欠損症がかなり
ニレートキナーゼによって，ATPの共存下ADP
の頻度で発見されている4）．幸いな：ことに，本症は
に変換されてしまう．またAMP一デアミナーゼに
プリン制限食とアロプリノール投与によって治療
よってIMPへと変換される．共存酵素の含量は
が可能である13）．しかし，未診断のまま放置されて
試料によってまちまちであることから，APRT活
いる症例も少なくないものと推定されている．こ
性で生じたAMPをいくら正確に測定しても誤っ
のように腎機能障害のリスクを負う本症を，なる
た低活性を得てしまうものと考えられた．従来の
べく早期にかつ正確に診断することは重要と考え
AMPのみを分離定量する方法では，健常者の平
られた．
均値が0．211U／gHb18），0．231U／gHb19）， Adeから
APRT欠損は必ずしもDHA結石症を合併す
ヌクレオチドをまとめて分離定量する方法では，
ることはなく4），本症の診断法として結石の赤外
0．411U／gHb20）21）と報告されている．そこで酵素
一875一
68
ALPとADAによって第二反応を行い， AMPと
析結果を示した．HPLC−ECDによる高感度測定
その代謝物を全てInoに回収して活性を求める新
をもってしても，健常人およびAPRT欠損のヘ
テロ接合体の血清と尿にDHAを検出することは
測定原理を考案した．
反応条件のうち基質の濃度は，APRT， HGPRT
でぎなかった．すなおち本法を使用してもヘテロ
ともに基質に対する親和性を十分に考慮して決定
接合体のスクリーニングは不可能である．また完
した．APRT活性測定の反応時間を60分と長く設
全欠損型（Complete−type）と日本人型（Japanese−
定した理由は，Burst反応によって誤った高活性
type）の間に，血清と尿中のプリン代謝物濃度に
を得ることを避けるためである．本法によって得
おける差異は認められなかった．
られた健常成人の赤血球APRT活性の分布は，
アロプリノール投与によるDHA排泄の低下と
Fig．2に示したごとくかなり広範囲に分布して
前駆体のAdeの上昇は，これまでの報告13）と同様
いた．分布形が高活性に裾を持つこと，女性が男
であった．
性に比べて高活性の傾向にある理由は，赤血球の
このように血清と尿中のDHAの測定が可能と
agingと関連しているためと考えられる．赤血球
なり，腎におけるDHAの排泄機構の解析の可能
APRT活性を解析する場合には，試料の取り扱い
性がでてきた．APRT欠損症の血清DHAレベル
の影…響，輸血の影響22）に加えて，赤血球のagingの
は腎機能正常例で1．5∼4．5μlno1〃であり，キサ
影響も十分に考慮する必要がある．
ンチン尿症の血清キサンチン濃度5）より若干低め
Table 1に示したCase 1∼3はAPRT完全欠
であった．DHAの腎での排泄機構はUAとは異
損型，Case 4は日本人型である．健常者集団から
なり，むしろキサンチンに似ているものと考えら
スクリーニングされたAPRT低活性異常例
れた．
（Case 8）について，活性値だけでは完全欠損型の
APRT欠損症のスクリーニングの対象として
ヘテロ接合体（Case 1の息子，娘と同様）か日本
透析患者と尿路結石患者を選んだ理由は，体液中
人型のヘテロ接合体（Case 4の母）の区別はつか
でのDHAの難溶性からくる合併症を考えてのこ
ない．しかしPRPPに対する親和性を検討したと
とである．621例の尿路結石患者に完全欠損型が1
ころ，apparent kmは5．0×10−5mol／」となり健常
例検出されたわけであるが，この頻度は検査セン
人の値と同様となったことから，完全欠損型のヘ
ターに集められた結石の赤外分光分析のパターン
テロ接合体の可能性がある．本法はAPRT完全
を再調査して求めたKamatani4）の報告（20，450例
欠損型と日本人型，両者のホモとヘテロ接合体を
中26例）に近似していた．
健常老集団からスクリーニングし，解析し得る性
今回行った赤血球APRT活性および血清と尿
中のDHAのスクリーニングにおいて，日本人型
APRT欠損症は1例も検出されなかったが，遺伝
能を十分有すると考えられた．
Lesch−Nyhan syndrome（Table 1， Case 5）
における赤血球APRT活性の高値は， Kelley23）の
性疾患には地域性の存在の可能性がある．日本人
総説と同様，PRPP高濃：度によるAPRTの安定
型APRT欠損の日本国内での分布にもかたより
化のためであろう．Case 6，7のAPRT高値は，
があるのかもしれない．
高活性に裾を持つ健常者集団の分布形を考えると
顕著な異常高値とは言えない．HGPRT欠損では
高UA血症を示すが， APRT欠損は腎障害合併に
よる二次的な高UA血症を除き，血中UA濃度を
結
語
APRT欠損症のスクリーニングと解析を目的
に，APRT活性の測定法ならびにDHAの定量法
の開発を行った．APRT活性の測定では， HPLC
反映することはない．また痛風例10例と健常者集
の利用とAPRT反応の後， ALPとADAによる
団の間にAPRTとHGPRTの大きな隔たりは認
第二反応を行う新測定原理により，ラジオアイソ
トープを必要としない正確な活性測定が可能と
められなかった．
Table 2にはAPRT欠損症のプリン代謝の解
なった．HPLC−ECDによるDHAの高感度測定
876一
69
法は，血清のDHA測定をも可能とした．両測定法
2052−2056， 1987
7）Groth I）P， Young LG：On the formation of
によって健常成人91例から1例のAPRT完全欠
an intermediate． in the adenine phosphor−
損のヘテロ接合体，尿路結石症患者621例から1家
ibosyltransferase reaction． Biochem Biophys
系2例のAPRT完全欠損型DHA結石症がスク
Res CQmm 43：82−87，1971
8）Faye S， Payne RB：Rapid measurement of
リーニングされた．
serum water to assess pseudo hyponatremia．
APRT欠損症におけるプリン代謝の解．析では，
Clin Chem 32：983−986，1986
9）山中 寿，鎌谷直之，西岡久寿樹ほか：Interleu−
完全欠損症と日本人型の間にプリン代謝物の上で
の差異は見出せなかった．また腎におけるDHA
の排泄機構はUAとは異なりキサンチンに似て
いた．
kin 2を用いた末梢血下細胞の遺伝酵素学的解析
一HGPRT欠損症を対象として一．医学のあゆみ
129 ：391−392， 1984
10）Kamatani N， Takeucbi F， Nishida Y et al：
Severe impairment in adenine metabolism with
ここに報告したAPRT活性の測定法とDHA
の定量法は，APRT欠損症の早期診断とその解析
a partial de丘ciency
of adenine phospho・
ribosyltransferase． Metabolism 34：164−168，
の有力な手段と成り得るものと考える．
1985
11）Kojima T， Nishina T， Kitamura M et al：
Biochemical studies on the purine metabolism
稿を終えるにあたり，御指導，御校閲賜りました東
京女子医科大学第3内科学教室平田幸正教授，東京女
of four cases with hereditary xanthinuria， Clin
Chim Acta 137：189−198，1984
子医科大学リウマチ・痛風センター西岡久寿樹教授，
12）Cartier P， Hamet M：Une nouvelle maladie
鎌谷直之助教授，虎の門病院臨床化学検査部北村元仕
matabolique：1e dehcit complet en adenine
部長，仁科甫啓副部長，ならびに御協力くださった東
phosphoribosyltransferase avee lithiase de 2，
京女子医科大学リウマチ・痛風センター医局，虎の門
8−dihydrQxyadenine． CR Acad Sci（Paris）279：
病院臨床化学検査部，虎の門病院分院検査室のみなさ
883−886， 1974
13）Van Acker KJ， Simmonds HA， Potter C et a1：
まに心から感謝の意を表します．
文
Complete deficiency of adenine phosphor−
献
ibosyltransferase：Report of a family． N Engl J
1）Seegmiller JE：Deficiency of adenine phos−
Med 297：127−132，1977
む
phoribosyltransferase（APRT）．勉Metabolic
14）Ericson A， Groth T， Niklasson F et al：
Plasma concentration and renal excretion of
Control and Disease（Boundy PK ed）pp872−874，
WB Saunders， Philadelphia（1980）
adenine and 2，8−dihydroxyadenine after admin・
2）Kahan B， Held KR， DeMars R；The locus
for human adenine phQsphoribosyltransferase
istration of adenine in man． Scand J Clin Lab
玉nvest 40：1−8， 1980
on chromosQme No．16． Genetics 78：
15）黒田昌男，三木恒治，清原久和ほか：Adenine
1143−1156， 1974
phosphoribosyltransferase部分欠損症による尿
路結石の1例．日泌尿会誌 17：283−288，1980
3）Simmonds HA：2，8−Dihydroxyadenine lith−
iasis． Clin Chim Acta 160：103−10＄，1986
16）Kelley WN， Levy RI， Rosenbloom FM et al：
4）Kamatani N， Terai C， Kuroshima S et al：
Adenine phosphoribosyltransferase deficiency：
Genetic and clinical stud三es on lg families with
Apreviously undescribed genetic defect in
adenine phosphoribosyltransferase deficiencies．
man． J CIin Invest 47：2281−2289，1968
Human Genet 75：163−168，1978
17）Fujimori S， Akaoka I， Takeuchi F et al：
Alter kinetic properties of a mutant adenine
5）Kojima T， Nisbina T， Kitamura M et al：
Reversed・phase liquid chromatographic deter−
mination of purine compounds in serum applied
phosphoribosyltransferase． Metabolism 35：
187−192， 1986
to studies of hypouricemia． Clin Chem 32：
18）木崎治俊，桜田知己：セルロースアセテート膜電
気泳動の利用に．よるHypoxanthine−Guanine及
びAdenine phosphoribosyltransferase活性測定
法．臨床化学 4：70−78，1975
287−290， 1986
6）Kojima T， Nishina T， Kitamura M et al：
Liquid chromatography with multichan−
nelultravio｝et detection used for studying dis・
19）Puukka R， Puukka M， Leppilampi M et al：
orders of purine metabolism， CIin Chem 33：
Erythrocyte adenosine deaminase， purine nu一
一877一
70
cleoside phosphorylase and
de五ciency of adenine phosphor三bosyltransfer−
phosphor−
ibosyltransferase activity in patients with
ase in ma血． Medicine 56：515う26，1977
へ
22）谷ロ敦夫，山中 寿，登 勉ほか：日本人型
APRT欠損症診断の問題点一T細胞抽出物によ
Down’s syndrome． Clin Chim Acta 126：275
−281， 1982
る酵素活性測定の有用性一．医学のあゆみ 137：
20）Johnson LA， Grodon RB， Emmerson BT：
Adenine phosphoribosyltransferase：Asimple
407−408， 1986
spectrophotometric assay and the incidence of
23）Kelley WN， Greene M正， Rosenbloom FM et
mutation in the normal population， Biochem
a1： Hypoxanthine−guanine phosphoribosyl−
Genet 15：265−272，1977
transferase de丘ciency in gout． Ann Intern Med
21）Fox III， Lacrotx S， Planet G et al： Partia1
70：155−206， 1969
一878一